אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:22 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם שפופרת המכילה וקטורים נפרדים לגנים של נוגדנים בעלי שרשרת כבדה ושרשרת קלה.
הוסף מגיב טרנספקציה ליצירת קומפלקסים עם הווקטורים.
העבירו את התערובת הזו לתאי מארח של יונקים ודגרו להפנמה.
הוסף חומר נוגד גושים כדי לקדם פיזור אחיד של תאים שעברו טרנספטציה, ולשפר את התאוששות התאים וצמיחתם.
הוסף תמיסה אנטי בקטריאלית-אנטי מיקוטית למניעת זיהום.
בתוך התא המארח, הווקטורים משתלבים בגנום המארח.
לאחר שעתוק גנים, mRNA בודדים יוצאים מהגרעין ועוברים תרגום ליצירת שרשראות נוגדנים מתהוות.
קיפול ושינוי נכון של השרשראות המתהוות מניב שרשראות כבדות וקלות.
שרשראות אלו משתלבות ליצירת נוגדנים מתפקדים במלואם, אשר משתחררים לאחר מכן לתווך החוץ-תאי.
קציר את המדיום והצנטריפוגה. מסננים את הסופרנטנט.
העבירו את התסנין דרך עמודת טיהור המאפשרת קשירה סלקטיבית של הנוגדנים.
בעזרת מאגר פליטה, יש להוציא את הנוגדנים המטוהרים.
גדל תאי CHO ב-200 מיליליטר מדיה לתוך צלוחיות ארוכות ומבולבלות של ארלנמאייר. שלב 5 מיליליטר של מדיה בסגנון חופשי CHO עם 50 מיקרוגרם של DNA משובט כבד משתנה ו-75 מיקרוגרם של DNA משובט קל משתנה בשפופרת של 15 מיליליטר. לאחר מכן, מערבול את הצינור. השאירו את התערובת בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות. הוסף 750 מיקרוליטר של 1 מיליגרם למלאי פוליאתילן אמין למיליליטר לתמיסת ה- DNA, ומערבל אותו באגרסיביות למשך 30 שניות
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים