מדידת ההפעלה של פונקציות אפקט בתיווך Fc על ידי נוגדנים HA

קחו דילולים סדרתיים של נוגדן המכוון לנגיף השפעת המגלוטינין, או HA, גליקופרוטאין המורכב מראש כדורי וגבעול.

הוסף את הדילולים על תאי יונקים שעברו טרנספטציה המבטאים HA הקשור לפני השטח. הנוגדנים נקשרים לאזורי גבעול ה-HA ויוצרים קומפלקסים חיסוניים.

להציג תאי T מהונדסים המבטאים קולטני Fc ומקודדים מדווח לוציפראז בשליטת גורם השעתוק NFAT.

במהלך הדגירה, הנוגדן הקשור ל-HA נקשר לקולטן Fc, בעוד שראש ה-HA נקשר לחומצה סיאלית, מה שמפעיל את הפעלת תאי T ומגביר את ריכוז הסידן הציטוזולי.

הפעלה זו יוזמת מפל איתות המביא לדה-פוספורילציה של NFAT, ומפעילה את הטרנסלוקציה הגרעינית שלו.

NFAT נקשר לרכיבי התגובה שלו בגנום, ומניע את ביטוי הלוציפראז.

הוסף מצע ביולומינסנט חדיר לתאים. לוציפראז מחמצן את המצע ומייצר אות.

ירידה בזוהר עם ירידה בריכוז הנוגדנים מאשרת הפעלת תאי T בתיווך נוגדנים ספציפיים לגבעול HA

כדי להעריך את יכולתם של נוגדנים ספציפיים בעלי עניין להתמקד בתאים המבטאים המגלוטינין, החלף את הסופרנטנט של תרביות התאים הנגועות בנגיף ב-25 מיקרוליטר של ציטוטוקסיות תלוית נוגדנים, או ADCC, מדיום בדיקה.

לאחר מכן, בצלחת נפרדת של 96 בארות, בצע דילול פי 4 של הנוגדנים המעניינים במדיום ADCC משולש וטרי החל מ-10 מיקרוגרם למיליליטר לפי הסכמה, והקפיד לכלול את הרקע וללא בקרות נוגדנים.

כאשר כל הנוגדן מדולל, העבירו 25 מיקרוליטר