יצירת וריאנטים של הימלטות מנגיף השפעת מפני נוגדנים מנטרלים

קחו למשל תרחיף של נגיף השפעת, המכיל גם זנים פראיים וגם זנים מוטנטיים.

גליקופרוטאין מעטפת ויראלית הנקרא המגלוטינין, או HA, נקשר לחומצה סיאלית על פני התא המארח, ומתווך כניסה ויראלית.

הוסף נוגדן מנטרל בריכוזים יורדים שנקשר ל-HA וחוסם את אתר הקישור של חומצה סיאלית.

זנים מוטנטיים, הנושאים מוטציות ב-HA המסייעות במניעת נטרול נוגדנים, נקראים גרסאות בריחה.

הזרקו את התערובת לביצי תרנגולות עובריות ללא פתוגנים, העבירו את הנגיפים לנוזל האלנטואי ודגרו.

נגיפים מנוטרלים על ידי נוגדנים אינם יכולים להיכנס לתאי הממברנה הכוריו-אלנטואית. נגיפים מוטנטיים לא מנוטרלים נכנסים לתאים, משתכפלים ומשתחררים לנוזל האלנטואי.

קצור את הנוזל האלנטואי המכיל אוכלוסיית הנגיף.

הכנס נוגדן ספציפי ל-HA בריכוזים יורדים, המנטרל את הזנים האחרים למעט גרסאות הבריחה.

הכנס תאי דם אדומים של עוף או RBCs. גרסאות בריחה לא מנוטרלות נקשרות לתאים, וגורמות לגושים של RBCs - המכונה המגלוטינציה, המאשרת יצירת וריאנט בריחה.

נוגדנים מנטרלים בעלי פעילות HI מנותחים עוד יותר על ידי הכנת 4 דילולים של הנוגדן המעניין בהגדלת ריכוזים פי 1 PBS בנפח של 100 מיקרוליטר לדילול. לאחר מכן, הכינו מלאי וירוסים של מיליון יחידות יוצרות פלאק למיליליטר פי 1 PBS בנפח של 400 מיקרוליטר.

לאחר מכן, ערבבו 100 מיקרוליטר של מיליון יחידות יוצרות פלאק למיליליטר של נגיף עם 100 מיקרוליטר מכל דילול נוגדנים או 100 מיקרוליטר של פי 1 PBS. דגרו את הדגימות למשך שעה באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני.

לאחר מערבולת קצרה, הזרקו 200 מיקרוליטר מכל תערובת לביצי עוף עובריות ספציפיות ללא פתוגנים. לאחר מכן, דגרו על הביצים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ללא פחמן דו חמצני למשך 40 עד 44 שעות. לאחר הדגירה, הקריבו את הביצים העובריות הנגועות בנגיף על ידי הנחתן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 6 שעות לפחות. לאחר מכן, קצרו את הנוזל האלנטואי מהביצים כפי שתואר קודם לכן.

לבסוף, אשר את גרסאות הבריחה על ידי ביצוע בדיקת HI כמתואר בפרוטוקול הטקסט.