אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:51 דק׳ • July 8th, 2025
קח עכבר מחוסן במטאלופפטידאז. קצרו את הטחול וקבלו תרחיף תאים.
מסננים את המתלים דרך רשת וצנטריפוגה, מסירים פסולת רקמות.
התאים המבודדים כוללים תאי B ספציפיים למטאלופפטידאז, המייצרים נוגדנים כנגד אפיטופים של מטאלופפטידאז.
הוסף תאי מיאלומה אלמותיים חסרי האנזים HGPRT, ומונע הצלה של נוקלאובסיסים לסינתזת נוקלאוטידים. הם שורדים באמצעות סינתזת נוקלאוטידים דה נובו.
צנטריפוגה כדי להשיג גלולה ולהשליך את הסופרנטנט.
הוסף PEG ודגירה, תוך גרימת איחוי תאי מיאלומה-B ליצירת היברידומות אלמותיות חיוביות ל-HGPRT.
הוסף מדיום HAT הכולל היפוקסנטין, אמינופטרין ותימידין. מעבירים לבארות המכילות שכבת הזנה של מקרופאגים צפקיים, המקדמים צמיחת היברידומה.
אמינופטרין חוסם סינתזת נוקלאוטידים דה נובו, וגורם לתאי מיאלומה לא מאוחים למות. תאי B לא מאוחים מתים בגלל תוחלת החיים הקצרה שלהם.
ההיברידומות החיוביות ל-HGPRT מצילות את מבשרי הנוקלאוטידים היפוקסנטין ותימידין, מתרבים ומפרישים נוגדנים חד-שבטיים ספציפיים למטאלופפטידאז.
קצור את הסופרנטנט כדי לאשר את ייצור הנוגדנים באמצעות בדיקות במורד הזרם.
כדי להתחיל, יש להזריק תוך צפקית 100 מיקרוגרם של חלבון APM לעכברים הבוגרים שנבחרו להגברת אנטיגן סופית. לאחר 3 ימים של הזרקה יש לאסוף את הטחול מעכברים, ולשטוף עם DMEM פעמיים כדי להסיר תאי דם ושומן.
סנן את תרחיף תאי הטחול באמצעות רשת נח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים