שיטה לייצור נוגדנים רקומביננטיים נגד מטלופפטידאז

התחל עם צינור המכיל חומר טרנספקציה מבוסס שומנים קטיוני והוסף פלסמידים לביטוי רקומביננטי.

הפלסמיד נושא גן המקודד נוגדנים רקומביננטיים המכוונים למטאלופפטידאז וחלבון פלואורסצנטי ירוק או GFP תחת מקדם אחד, בעוד שגן העמידות לאנטיביוטיקה נמצא תחת מקדם אחר.

שומנים טעונים חיובית מקיימים אינטראקציה עם פלסמיד טעון שלילי ויוצרים קומפלקס.

העבירו את הקומפלקסים לצלחת מרובת בארות המכילה תאי יונקים, המאפשרים לפלסמיד להיכנס לציטופלזמה.

הפלסמיד מגיע לגרעין ומתועתק ל-mRNAs עבור חלבוני עמידות לאנטיביוטיקה ו-mRNA דו-כיווניים המקודדים נוגדנים רקומביננטיים ו-GFPs.

mRNA אלה מובילים לייצור נוגדנים רקומביננטיים, GFPs וחלבוני עמידות לאנטיביוטיקה.

לאחר טרנספקציה, החלף את המדיום במדיום מועשר בסרום.

הכנס אנטיביוטיקה, תוך סילוק סלקטיבי של תאים שאינם עוברים טרנספטציה בזמן שהתאים העמידים לאנטיביוטיקה שורדים.

באמצעות טכניקת מיון התאים המופעלת על ידי פלואורסצנטיות, אסוף את התאים הפלואורסצנטיים הירוקים המבטאים נוגדנים רקומביננטיים.

זרעו את התאים המדוללים במדיום נטול סרום ודגרו כדי לייצר נוגדנים רקומביננטיים כנגד מטאלופפטידאז.

גדל את הנוגדנים הרקומביננטיים pET-28a(+) aminopeptidase בחיידקים שעברו טרנספורמציה BL21 בנוכחות 0.4 מילי-מולרית beta-D-1-thiogalactopyranoside בשייקר אורביטלי ב-37 מעלות צלזיוס למשך 10 שעות. זרע