אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:53 דק׳ • July 8th, 2025
קחו וקטורי ביטוי אוקריוטיים, המקודדים שרשרת כבדה של נוגדנים או שרשרת קלה של נוגדנים, משובטים מתאי B ספציפיים לאנטיגן.
הציגו פוליאתילנימין, פולימר קטיוני, המקיים אינטראקציה אלקטרוסטטית עם הווקטורים הטעונים שלילית, ויוצר פוליפלקסים.
דגירה על תאי יונקים עם הפוליפלקסים, הנצמדים לתאים ומופנמים באמצעות אנדוציטוזיס. האנדוזומים המתקבלים מתמזגים עם ליזוזומים.
הפולימרים בפוליפלקסים גורמים לנפיחות אוסמוטית של השלפוחית, מה שמוביל לקרע שלה ולשחרור הווקטורים.
הווקטורים המשוחררים נכנסים לגרעין ומתועתקים ל-mRNA בעל שרשרת כבדה ושרשרת קלה, העוברים תרגום באמצעות ריבוזומים ברטיקולום האנדופלזמי
.שרשראות הפפטידים המתקבלות מתאספות לנוגדנים, המועברים לגולגי ונארזים בשלפוחיות הפרשה.
עם איחוי שלפוחיות ההפרשה וקרום התא, הנוגדנים משתחררים מחוץ לתא.
קצור את הסופרנטנט המכיל נוגדנים לבדיקות במורד הזרם.
זרע 15,000 תאי כליה עובריים אנושיים ב-200 מיקרוליטר של מדיום הנשר המותאם של Dulbecco בתוספת 10% סרום בקר עוברי בכל באר של צלחת שטוחה של 96 בארות, יום לפני הטרנספקציה. לאחר מכן, דגרו את הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס למשך הלילה ב-5% פחמן דו חמצני. קוטרנספקט את התאים באמצעות מגיב טרנספקציה נגזרת פוליאתילנימין ליניארי. לדלל 0.5 מיקרוליטר של מגיב טרנספקציה DNA עם 10 מיקרוליטר של 150 מילימולר של נתרן כלורי.
לאחר מכן, יש לדלל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים