טכניקה לטיהור נוגדנים חד שבטיים המיוצרים על ידי תאי שחלה של אוגר סיני

קח עמודת FPLC המכילה שרף זכוכית נקבובי עם חלבון A משותק - חלבון חיידקי קושר נוגדנים. אזן את העמודה עם מאגר pH ניטרלי.

הוסף נוזל תרבית תאים שנקצר מתאי שחלה של אוגר סיני, המכיל נוגדנים חד שבטיים וחלבונים מזהמים ו-DNA.

חלבון A נקשר לאזור ה-Fc של הנוגדן, ומשתק אותם.

חלק מהמזהמים מתחברים באופן לא ספציפי לשרף, ואילו השאר זורמים דרכם.

בכרומטוגרמה, ספיגת UV מוגברת במהלך טעינת הדגימה מעידה על ריכוז חלבון גבוה בזרימה.

שטפו עם מאגר שיווי המשקל כדי להסיר מזהמים לא קשורים, המסומנים על ידי ירידה בספיגה.

יש לשטוף עם מאגר עתיר מלח, לשבש את האינטראקציות הלא ספציפיות ולהסיר את המזהמים, המסומנים על ידי שיא טומאה קטן.

הוסף מאגר פליטה של pH נמוך כדי לשבש את האינטראקציה של נוגדן חלבון A ולסלק את הנוגדנים, שנאספים על ידי מעקב אחר השיא המתאים.

לנטרל את ה-pH של הנוגדנים שנאספו כדי למנוע פירוק.

התחל בפתיחת התוכנה המחוברת למערכת הטיהור והנחת צינורות חרוטיים של 15 מיליליטר כדי לאסוף את הנוגדנים המטוהרים, וצינורות חרוטיים של 50 מיליליטר כדי לאסוף את הזרימה במהלך שטיפת המלח הגבוהה לתוך אספן השברים.

לאחר מכן, הוסף נוזל תרבית תאים שנקטף בסינון נקבוביות של 0.22 מיקרומטר למזרק ריק של 12 מיליליטר עם זרבובית מכוסה. לאחר הסרת המכסה, הכנס את פיית המזרק ליציאת ההזרקה הידנית של מערכת הטיהור. סובב את המזרק כדי להדק אותו ב