בדיקה למדידת נוגדן מנטרל titer ספציפי עבור וירוס סינסיטיאלי נשימתי
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:01 דק׳ • July 8th, 2025
קח סרום אנושי מדולל סדרתי ומומת חום המכיל נגיף סינציאלי נשימתי או נוגדנים מנטרלים ספציפיים ל-RSV.
הוסף את ההשעיה הוויראלית. הנוגדנים מנטרלים את הנגיפים באופן תלוי דילול.
הכניסו את התערובת לחד-שכבות של תאי אפיתל אנושיים ודגרו לספיחה ויראלית.
זורקים את התערובת. הוסף מדיה המכילה קרבוקסימתיל צלולוז ויוצר כיסוי מוצק למחצה. דגירה.
RSV מנצל את מנגנון התא המארח כדי לסנתז RNA וחלבונים ויראליים, אשר לאחר מכן מתאספים וניצנים כנגיפים בודדים.
תאים נגועים מתים בסופו של דבר. קרבוקסימתיל צלולוז מגביל את תנועת הנגיף, גורם לזיהום מקומי ולמוות של תאים, ויוצר פלאק.
הסר את הכיסוי.
תקן את התאים עם מאגר המכיל אצטון. הציגו חוצץ חוסם המכיל חומר ניקוי כדי לחדור לתאים ולמנוע אינטראקציות נוגדנים לא ספציפיות.
הוסף נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבונים נגיפיים.
שכבת נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור המכוונים לנוגדנים הראשוניים.
דמיין את הבארות כדי לכמת לוחות פלורסנט.
דילול הסרום הגבוה ביותר המנטרל חמישים אחוז מה-RSV מייצג את טיטר הנטרול.
לפני חיסון תאי A549 ב-RSV, בדוק את לוחית התא תחת מיקרוסקופ אור כדי לאשר כי חד-שכבות תאי A549 הן 80% מתלכדות. לאחר מכן, הפוך את הצלחת בעדינות כדי להשליך את המדיה, ומחק קלות את הצלחת על מגבת נייר סטרילית וסופגת. לאחר כל שטיפה עם PBS מסוננים וסטריליים.
לאחר מכן, הוסיפו 100 מיקרוליטר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים