זיהוי נוגדנים עצמיים של האי האנושי באמצעות בדיקת אלקטרוכימילומינסנציה

כדי לזהות נוגדנים עצמיים באיים - סמן ביולוגי לסוכרת מסוג 1 - קחו דגימות סרום אנושיות והוסיפו חומצה אצטית כדי לעכב רכיבים מפריעים.

דגירה ולאחר מכן הוסף חיץ אלקליין כדי לנטרל את החומצה.

העבר את הסרום המטופל לצלחת מרובת בארות המכילה תערובת של אוטואנטיגנים של איים אנושיים, כולל לכידת ביוטינילציה ואנטיגנים מצומדים רותניום, כל אחד בריכוז אופטימלי לבדיקה.

הנוגדן העצמי של האי בדגימה החיובית מגשר בין האנטיגן המצומד לרותניום לאנטיגן הלכידה הביוטינילית, ויוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדן.

העבירו את התערובת לצלחת אלקטרוכימילומינסנציה מצופה סטרפטווידין שטופלה מראש בחומר חוסם ומצוידת באלקטרודות עובדות ונגד.

דגירה כדי לאפשר אינטראקציות מורכבות ביוטיניליות עם הסטרפטווידין הקשור ולאחר מכן לשטוף.

הוסף חוצץ המכיל טריפרופילאמין או TPA.

במכשיר אלקטרוכימילומינסנציה, יישום המתח בין האלקטרודות יוזם את החמצון של רותניום ו-TPA, ויוצר רדיקלי TPA.

רדיקלי ה-TPA מעוררים קומפלקסים של רותניום, הפולטים פוטונים בזמן שהם חוזרים למצב הקרקע שלהם.

כימילומינסנציה גבוהה בדגימה החיובית מעידה על נוכחות של נוגדנים עצמיים באי.

מערבבים את האנטיגן העצמי של האי האנושי עם ביוטין או תג סולפו ביחס מולארי של 1:5 בצינור, ומכסים את הצינור בנייר אלומיניום מכיוון ששני התגים רגישים לאור. לאחר מכן, דגרו את הצינור למשך שעה בטמפרטורת החדר. בינתיים