בדיקה חיסונית מבוססת נייר לזיהוי אימונוגלובולין G

התחל עם דיסקיות נייר הסינון הפונקציונליות אמין וטבול אותן בגלוטרלדהיד, מגיב צולב.

גלוטראלדהיד מגיב עם קבוצות האמין באמצעות תגובת אמין-אלדהיד.

הניחו את הדיסקים בצינור. יש להוסיף מים, לנער ולשאוף כדי להסיר את שאריות הגלוטרלדהיד.

לאחר הייבוש, הכנס את נוגדני הלכידה הספציפיים לשבר אימונוגלובולין-G-Fc. קבוצות אמין על נוגדנים אלה מקיימות אינטראקציה עם קבוצות אלדהיד על דיסקיות נייר, מה שמקל על הקיבוע הקוולנטי שלהן.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים ולהכניס חוצץ חוסם למניעת קשירה לא ספציפית.

לאחר מכן, הוסף דגימת בדיקה המכילה מולקולות אימונוגלובולין G על דיסק הנייר. מולקולות האימונוגלובולין G מקיימות אינטראקציה עם נוגדני הלכידה.

שכבת נוגדנים לזיהוי ספציפיים לשבר IgG-Fc מצומדים של חזרת פרוקסידאז המקיימים אינטראקציה עם האימונוגלובולין G הקשור מראש.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים ולהוסיף תערובת של מצע כרומוגני ומי חמצן.

בנוכחות מי חמצן, חזרת פרוקסידאז מזרז את חמצון המצע הכרומוגני, ויוצר צבע כחול על הדיסק, המעיד על נוכחות של אימונוגלובולין G.

הוסף חמישה מיליליטר של תמיסת גלוטרלדהיד 0.05% לבקבוק זכוכית של 20 מיליליטר. טבלו 15 דיסקי נייר סינון בזרימה בינונית פונקציונליים אמין בתמיסה זו, ושמרו למשך שעה עם ניעור בטמפרטורת החדר. במקביל, חזור על שלב זה כדי להכין עוד 15 דיסקי נייר סינון מהירים