בדיקת מבחנה להערכת השפעת נוגדנים על ביופילם קנדידה טרופיקליס

קח מיקרופלייט המכיל את הפטרייה קנדידה טרופיקליס.

התאים מפרישים Sap2, אנזים פרוטאוליטי המבקע גליקופרוטאין טרנסממברני הנקרא Msb2, ומסיר את התחום המעכב שלו.

זה גורם לפטרייה להיצמד לתחתית ולצמוח למיקרו-מושבה של שמרים וצורות חוטיות. התאים מפרישים רכיבים מסיסים וביופולימרים, ומתחילים היווצרות ביופילם.

הוסף דגימת סרום המכילה נוגדנים ספציפיים ל-Sap2 לבארות נבחרות, ודגר בחושך.

הנוגדנים נקשרים ל-Sap2 ומנטרלים את פעילותו, ומעכבים את כדאיות התאים ואת הבשלת הביופילם.

בבארות לא מטופלות, הביופילם מבשיל לרשת צפופה של תאים ומטריצה חוץ-תאית.

שאפו את הנוזל, שטפו את הביופילם וייבשו את הצלחת באוויר. הוסף מצע כרומוגני, ודגר בחושך.

תאים ברי קיימא, המשתמשים באוקסידורדוקטאזים הקשורים לממברנה, מפחיתים את המצע לתוצר צבעוני.

העבירו את הסופרנטנט הצבעוני וקראו את הספיגה.

ספיגה נמוכה יותר בבארות המטופלות בסרום מעידה על עיכוב ביופילם בתיווך נוגדנים.

הכן דילולים סדרתיים של דגימות סרום מושבתות בחום במדיום RPMI1640 MOPS סטרילי. הוסף 100 מיקרוליטר מדילול הסרום שנבחר לכל באר של צלחת המיקרוטיטר של 96 בארות.

בעמודה 10, הוסף רק מדיום RPMI1640-MOPS לבקרה החיובית של פטריות בלבד. הוסף דילול של 1 עד 50 של סרום לכל הבארות בעמודה 11 כדי לשמש כבקרה שלילית ללא פטריות בתוספת סרום. לאחר כיסוי הצלחת במכסה ונייר אלומיניום, דגרו את ה