אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:31 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת תרבית המכילה חתכים קריולוגיים של עכבר ג'ג'ונום קבועים בפורמלין ומלאי ג'לטין הכוללים תאי ציצית עם מיקרוווילי אפיקלי וסומה בצורת סליל.
יש לשטוף עם מאגר המכיל חומר ניקוי כדי לחלחל את קרומי התאים.
הוסף תמיסת אחזור אנטיגן אלקליין. דגירה כדי לשבור קישורים צולבים של חלבונים המושרים על ידי קיבוע, וחושפים את החלבונים לצביעה.
יש למרוח תמיסת חסימה כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
שכבת נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבון קושר אקטין, במיוחד זרחן בתאי ציצית.
הסר נוגדנים לא קשורים. הציגו תערובת של נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור, צבע קושר DNA ומצומד צבע פלואורסצנטי.
הנוגדנים המשניים נקשרים לנוגדנים ראשוניים, תוויות הצבע המצומדות של פלואידין-פלואורסצנטי אקטין, והצבע הקושר ל-DNA מסמן את גרעיני התאים.
הסר רכיבים לא קשורים והוסף מאגר ללא חומרי ניקוי.
העבירו את החלק למגלשת זכוכית מצופה דבק, והרכיבו אותו במדיה.
תחת מיקרוסקופ קונפוקלי, תאים ירוקים בצורת סליל עם פלואורסצנטיות מוגברת בקצה הלומינלי ומסת שורש אדומה מורחבת מצביעים על נוכחות של תאי ציצית.
כדי להכין קטעי ג'ג'ונום, התחל בהגדרת טמפרטורת תא הקריוסטט וטמפרטורת האובייקט למינוס 22 מעלות צלזיוס. הנח את גוש הרקמה הקפוא בתבנית קריו בתא הקריוסטט למשך 15 דקות לפחות. לאחר 15 דקות, חותכים את הבלוק לשניים בעזרת סכין גילוח כדי לחשוף את החלק ה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים