שיטה מבוססת אימונופלואורסנציה להדמיית תאי Tuft בקריוקציות Jejunum

0 views • 3:31 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התחל עם צלחת תרבית המכילה חתכים קריולוגיים של עכבר ג'ג'ונום קבועים בפורמלין ומלאי ג'לטין הכוללים תאי ציצית עם מיקרוווילי אפיקלי וסומה בצורת סליל.

יש לשטוף עם מאגר המכיל חומר ניקוי כדי לחלחל את קרומי התאים.

הוסף תמיסת אחזור אנטיגן אלקליין. דגירה כדי לשבור קישורים צולבים של חלבונים המושרים על ידי קיבוע, וחושפים את החלבונים לצביעה.

יש למרוח תמיסת חסימה כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

שכבת נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבון קושר אקטין, במיוחד זרחן בתאי ציצית.

הסר נוגדנים לא קשורים. הציגו תערובת של נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור, צבע קושר DNA ומצומד צבע פלואורסצנטי.

הנוגדנים המשניים נקשרים לנוגדנים ראשוניים, תוויות הצבע המצומדות של פלואידין-פלואורסצנטי אקטין, והצבע הקושר ל-DNA מסמן את גרעיני התאים.

הסר רכיבים לא קשורים והוסף מאגר ללא חומרי ניקוי.

העבירו את החלק למגלשת זכוכית מצופה דבק, והרכיבו אותו במדיה.

תחת מיקרוסקופ קונפוקלי, תאים ירוקים בצורת סליל עם פלואורסצנטיות מוגברת בקצה הלומינלי ומסת שורש אדומה מורחבת מצביעים על נוכחות של תאי ציצית.

כדי להכין קטעי ג'ג'ונום, התחל בהגדרת טמפרטורת תא הקריוסטט וטמפרטורת האובייקט למינוס 22 מעלות צלזיוס. הנח את גוש הרקמה הקפוא בתבנית קריו בתא הקריוסטט למשך 15 דקות לפחות. לאחר 15 דקות, חותכים את הבלוק לשניים בעזרת סכין גילוח כדי לחשוף את החלק הרוחבי של הג'ג'ונום. הרכיב מחצית מהבלוק על מתאם קריוסטט. חתכו את הג'ג'ונום המלא בג'לטין לחלקים בעובי 30 מיקרון. השתמש במלקחיים קפואים כדי להעביר בעדינות את החלקים לתבנית תרבית בגודל 35 מילימטר המכילה 3 מיליליטר PBS.

לאחר שטיפת החלקים שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד עם 3 מיליליטר PBS-T, הוסף 3 מיליליטר של תמיסת אחזור אנטיגן טרייה שהוכנה לכלי המכיל את החלקים הצפים בחופשיות. לאחר מכן, סגרו את המכסה, אטמו את הפער בין המנה למכסה בעזרת רצועת סרט ויניל, ודגרו בחום של 50 מעלות צלזיוס בחממת הכלאה למשך שלוש שעות מבלי לרעוד.

לאחר צביעה חיסונית, העבירו את צלחת החלקים המוכתמים ב- PBS למיקרוסקופ סטריאוסקופי. הנח 200 מיקרוליטר PBS בטיפה במרכז שקופית זכוכית לבנה מצופה AMS. לאחר מכן, השתמש בקצה פיפטה P200 כדי להעביר קטע ג'ג'ונום אחד מהצלחת לתוך הטיפה.

לאחר התאמת יישור הקטע, שאפו את כל ה-PBS הנותרים המקיפים את הקטע. הוסף 20 מיקרוליטר של מדיית הרכבה מימית והנח כיסוי על גבי המדיה. אטום מיד את קצוות הכיסוי עם מדיית הרכבה מבוססת קסילן, והניח לייבוש במשך שעתיים-שלוש לפני תחילת המיקרוסקופיה הקונפוקלית.

09:16

תרבות איברים שלמים הר Immunofluorescence מכתים של עכבר Wolffian צינוריות

Related Videos

0 Views

06:09

שימוש בפני הפנים הללו Immunofluorescence כתמים כדי להתבונן בתאי כלי דם אנדותל ישירות

Related Videos

0 Views

10:25

בידוד והערכה כמותית של תאי המברשת מקנה הנשימה של העכבר

Related Videos

0 Views

20:47

טכניקה במקביל דמיינו ספציפיות וירוס CD8 + T ו-תאים הנגועים בווירוס תאים באתרו

Related Videos

0 Views

09:45

ויזואליזציה של תאים ביניים של רשת (ICC) קחאל ב עכברים

Related Videos

0 Views

06:15

שיטת לוקליזציה של In Vivo Immunofluorescence לחקר הפצה ביולוגית של נוגדנים

Related Videos

0 Views

05:01

הדמיה אימונופלואורסצנטית מרובת משתתפים לניתוח תת-אוכלוסיות תאי T עמידים לאימונותרפיה

Related Videos

0 Views

07:05

בתיווך פלורסצנטיות טומוגרפיה זיהוי, כימות הקשורות מקרופאג דלקת מעיים מאתר

Related Videos

0 Views

09:51

חיסונית-פלורסנט תיוג של Microtubules וחלבונים Centrosomal Vivo לשעבר רקמת המעי ו 3D במבחנה Organoids מעיים

Related Videos

0 Views

06:26

השימוש נוגדנים Anti-פוספו-girdin להמחיש אניץ מעיים בתאי עכבר לתרשים מעי צם Cryosections

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026