טכניקת In Vivo למעקב אחר סחר בתאי T המושרה על ידי נוגדנים דו-ספציפיים לגידולים

קח עכבר מורדם ומדוכא חיסון הנושא קסנוגרפט גידול תת עורי המבטא יתר על המידה אנטיגן הקשור לגידול או TAA.

הזרקה רטרואורביטלית של תאי T אפקטור המבטאים את האנזים לוציפראז.

מתן תת עורי של אינטרלוקין 2, אפקטור התומך בציטוקינים הישרדות תאי T.

הזרקה רטרואורביטלית של נוגדנים דו-ספציפיים המהונדסים להכיל אתרי קישור לתאי T ותאי גידול. אפשר לעכבר להתאושש.

הנוגדנים ותאי ה-T מגיעים לגידול דרך מחזור הדם.

הנוגדנים נקשרים ל-CD3 על תאי ה-T ול-TAA על תאי הגידול, וגורמים לתאי ה-T האפקטורים לשחרר רעלנים שיוזמים אפופטוזיס בתאי הגידול ומשחררים כימוקינים המגייסים יותר תאי T לגידול.

להרדים את העכבר, להזריק רטרואורביטלית מצע לוציפראז ולהמשיך להדמיה in vivo.

לוציפראז בתוך תאי ה-T מחמצן את המצע ופולט ביולומינסנציה.

התבונן בביולומינסנציה לאורך זמן. גודל האות נמצא בקורלציה עם מידת חדירת תאי T בתוך הגידול.

לאחר הרדמת העכבר באמצעות מחט בקוטר 26, יש להזריק 20 מיליון תאי T ב-100 מיקרוליטר של מדיה רטרו-אורביטלית. יש לתת 1,000 יחידות של IL-2 רקומביננטי באופן תת עורי כדי לתמוך בהישרדות תאי T in vivo. לאחר מכן, יש לתת את הנוגדן הדו-ספציפי רטרו-אורביטלי או תוך צפק.

להדמיה in vivo, יש לתת 100 מיקרוליטר של שלושה מיליגרם של D-luciferin על ידי הזרקה רטרו-אורביטלית עם מחט בגודל 26 בעכבר מורדם. כדי לצלם תמונות, הנח את העכבר בתא