טכניקת תיוג כפול של אימונופלואורסנציה כדי לדמיין חלבונים מארחים ופתוגנים בתא נגוע

0 צפיות3:44 דק' • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התחל עם תאי אפיתל קבועים וחדירים הנגועים בטפיל פתוגני.

הוסף מאגר חוסם כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

שכבת נוגדנים ראשוניים רב-שבטיים של עכברים, במיוחד אינטראקציה עם חלבוני הטפיל.

הוסף נוגדנים משניים אדומים רחוקים המסומנים בפלואורופור המקיימים אינטראקציה עם נוגדנים ראשוניים הקשורים לחלבון טפיל.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים. חסום עם נוגדנים נגד עכברים הנקשרים לנוגדנים ראשוניים, וממזער את התגובתיות הצולבת במהלך תיוג חלבון מארח.

הוסף נוגדנים ראשוניים חד-שבטיים של עכבר המכוונים לריבונוקלאופרוטאינים מארחים בתוך תאי אפיתל.

שכבה עם תערובת של נוגדנים משניים ירוקים המסומנים על ידי פלואורופור ופאלואידין מצומד פלואורופור אדום, מה שמקל על תיוג הנוגדנים הראשוניים הקשורים לחלבון המארח ואקטין, בהתאמה.

שוטפים עם חיץ. הרכבה באמצעות מדיום המכיל כתם DNA, המקנה צבע כחול לגרעין המארח, גרעין הטפיל והקינטופלסט.

נתח את הדגימות באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי. טכניקת האימונופלואורסצנציה עם התווית הכפולה מציגה חלבונים מארחים ירוקים וחלבונים טפיליים אדומים, מה שמאפשר את הלוקליזציה התת-תאית המדויקת שלהם.

הוסף תאי LLC-MK2 בצלחות של 24 בארות המכילות כיסויים מעוגלים מעוקרים UV והניחו להם להתיישב למשך 16 שעות. לאחר מכן כדי להדביק את התאים, הוסיפו סופרנטנט המכיל T. cruzi לכל באר, ודגרו במשך שש שעות. לאחר מכן, שטפו את הכיסויים המכילים את התאים הנגועים והלא נגועים 5 פעמים עם PBS.

לאחר מכן, תקן את התאים עם 2% פרפורמלדהיד ו- PBS. לאחר 10 דקות, שטפו את הכיסויים שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד עם PBS, ואז חלחלו את הכיסויים עם חומר ניקוי לא יוני למשך 10 דקות.

לאחר שלוש שטיפות PBS של 5 דקות, דגרו את החלקות הכיסוי בתמיסת חסימה למשך 30 דקות, ולאחר מכן דגירה נוספת של 30 דקות עם נוגדן חד שבטי או רב-שבטי של עכבר. לאחר השטיפה, דגרו את הכיסויים למשך 30 דקות עם נוגדן משני בתמיסת חסימה ופאלואידין כדי להכתים חוטי אקטין בתא המארח.

לאחר מכן, שטפו את הכיסויים עם PBS שלוש פעמים שוב לפני מריחת כמות קטנה של מגיב הרכבה נגד דהייה עם מדיום DAPI על פני השקופית. בעזרת מלקחיים, הטה בעדינות את הכיסוי במדיום כדי למנוע היווצרות בועות.

לתיוג כפול, לאחר דגירה של החלקות הכיסוי ותמיסת החסימה כפי שהודגם קודם לכן, דגרו אותם בנוגדנים הפוליקלונליים של העכבר למשך 30 דקות. לאחר מכן, שטפו את הכיסויים שלוש פעמים למשך 5 דקות כל אחד עם PBS לפני הדגירה עם הנוגדן המשני למשך 30 דקות.

לאחר מכן לאחר שלוש שטיפות PBS, בצע שלב חסימה שני עם IgG נגד עכבר ארנב AffiniPure מדולל בתמיסת חסימה. לאחר 30 דקות, שטפו שוב את הכיסויים עם PBS לפני הדגירה עם הנוגדן החד-שבטי של העכבר למשך 30 דקות נוספות.

לאחר מכן, לאחר שלוש כביסות PBS, דגרו את הכיסויים עם נוגדן IgG2b נגד עכברים עזים ופאלואידין. לאחר מכן, לאחר שלוש כביסות PBS, יש למרוח מגיב הרכבה נגד דהייה כפי שהודגם קודם לכן.

09:16

תרבות איברים שלמים הר Immunofluorescence מכתים של עכבר Wolffian צינוריות

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:18

זיהוי של שרירי השלד תאים הלוויין על-ידי Immunofluorescence עם Pax7 ו- Laminin נוגדנים

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:05

מולטיפלקס אימונופלואורסנציה בשילוב עם ניתוח תמונה מרחבית להערכה קלינית וביולוגית של מיקרו-סביבה של הגידול

סרטונים קשורים

0 צפיות

20:47

טכניקה במקביל דמיינו ספציפיות וירוס CD8 + T ו-תאים הנגועים בווירוס תאים באתרו

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:16

זיהוי של רנ"א נגיפי על ידי הקרינה באתרו הכלאה (דגים)

סרטונים קשורים

0 צפיות

05:19

טכניקת אימונופלואורסנציה ללוקליזציה של חלבונים נגיפיים בתאים נגועים

סרטונים קשורים

0 צפיות

11:56

תיוג ההפרש של על פני קרום תא וחלבונים הפנימו לאחר האכלת נוגדן שידורים חיים בתרבית נוירונים

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:28

Immunofluorescence לפקח על הספיגה הסלולארית של לקטופרין האדם והפעילות הקשורה אנטי נגד וירוס הצהבת מסוג C

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:40

ניתוח הטמפורלי של רוברטסונית גרעינית-כדי-cytoplasmic של חלבון 1 וירוס הרפס סימפלקס מאת Immunofluorescent קונפוקלית

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:24

הדמיה פלואורסצנטית מרובת תאים בודדים כדי לדמיין חומצות גרעין וחלבונים ויראליים ולפקח על HIV, HTLV, HBV, HCV, נגיף זיקה וזיהום שפעת

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026