אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:29 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם בקבוק המכיל תאי יונקים שעברו טרנספטציה יציבה במדיום נטול סרום בתוספת חומר פעילי שטח לא יוני למניעת צבירת תאים.
תאים אלה נושאים גנום שונה המכיל גנים משולבים של שרשרת כבדה וקלה לייצור נוגדנים טיפוליים.
הכירו את הטריפטון, מקור עשיר בחומרים מזינים של פפטידים וחומצות אמינו החיוניות לחילוף החומרים התאי.
התא מנצל את חומצות האמינו והפפטידים הללו, ומתרבה, וכתוצאה מכך צמיחת יתר התומכת בתפוקת נוגדנים גבוהה יותר.
ביטוי הגנים בתאים מניע ייצור של פוליפפטידים כבדים וקלי שרשרת.
ברטיקולום האנדופלזמי, שרשראות אלו מתקפלות ומתעמעמות באמצעות קשרי דיסולפיד בין-שרשרתיים, ויוצרות נוגדנים טיפוליים.
במנגנון גולגי, נוגדנים עוברים שינויים לאחר התרגום. לאחר מכן הם נארזים לשלפוחיות ומשוחררים למדיום.
דגרו על התאים למשך זמן ארוך יותר כדי להגביר את ייצור הנוגדנים.
כאשר כדאיות התאים מתחילה לרדת, קצרו את הסופרנטנט.
סננו את הסופרנטנט המכיל נוגדנים טיפוליים ואחסנו אותו בטמפרטורה נמוכה יותר לשימוש מאוחר יותר.
תאי זרע ב -2 x 105 תאים למיליליטר ב -100 מיליליטר של מדיום נטול סרום בשתי צלוחיות דגרו על התאים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני ב-120 סיבובים לדקה למשך 24 שעות. לתרבית עם תוספי תזונה, הוסיפו טריפטון לריכוז סופי של 0.5%. לאחר מכן, השתמש במדיום נטול סרום כדי להשוות את נפח התרבית ללא תוסף. דגרו על התאים למשך שבעה ימים נוספים.
מהיום השמיני של התרבות ואילך, ספור את התאים מדי יום באמצעות המוציטומטר כדי לנטר את כדאיות התאים. ברגע שכדאיות התא מגיעה לפחות מ -80%, קצרו את התרבית על ידי צנטריפוגה ב -3,000 פעמים גרם למשך 15 דקות. לאחר מכן, יש לעקר את הסופרנטנט באמצעות מסנן של 0.22 מיקרומטר. אחסן את הסופרנטנטים ב-4 מעלות צלזיוס בטווח הקצר או הקפיא ב-4 מעלות צלזיוס לטווח הארוך.