טכניקת צביעה אימונופלואורסצנטית לזיהוי נוירוגנזה של היפוקמפוס בוגר

קחו קטע מוח של עכברים המורכב מפיתול ההיפוקמפוס המשונן, אתר לנוירוגנזה המורכב מאבות עצביים בשלבי התמיינות מובחנים.

העבר את הקטע לתמיסה חוסמת חדירה. מולקולות דטרגנט בתמיסה מחלחלות לתאים, בעוד החלבונים חוסמים את אתרי הקישור הלא ספציפיים.

הוסף קוקטייל נוגדנים ראשוני המכוון לסמני נוירוגנזה ספציפיים, חלבון הקשור למיקרו-צינוריות וחלבון נימה

ביניים.

הסר את הנוגדנים הלא קשורים. להציג נוגדנים משניים שונים המסומנים בפלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.

הוסף חלבוני סרום מאותו מארח כמו אחד הנוגדנים העיקריים, והרווי את הפרטופים על הנוגדנים המשניים.

הציגו שברי Fab חד-ערכיים הרווים את האפיטופים של חלבוני הסרום, ומונעים קשירה לא ספציפית.

הוסף נוגדן ראשוני שני שגדל על ידי אותו מארח, ונקשר לחלבון נימה ביניים אחר.

הציגו נוגדנים משניים המסומנים בפלואורופור המכוונים לנוגדנים הראשוניים השני.

באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית, זהה את תת-סוגי האב העצביים המבטאים שילובי סמנים ייחודיים.

התחל בהעברת החלקים מתמיסת נוזל הקפאה ל- TBS בעזרת מברשת עדינה. שטפו היטב את החלקים, החל משטיפת לילה בחום של 4 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן חמש שטיפות של 10 דקות בטמפרטורת החדר. יש לבצע את כל הדגירות הללו בתסיסה עדינה מתמשכת.

אם אחד האנטיגנים המעניינים הוא אנלוגי תימידין, יש ליישם שלב דנטורציה של חומצה הידרוכלורית בשלב זה, ואחריו