טכניקת תיוג חיסוני כדי לדמיין את לוקליזציה תת-תאית של חלבונים

0 views • 5:04 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התחל בשטיפת קטע לב קבוע במאגר נתרן קקודילאט המייצב את מבנה הרקמה. טבלו את הקטע באוסמיום טטרואוקסיד כדי להכתים את שומני הממברנה.

יש לטפל בנתרן אצטט כדי לשמור על pH אופטימלי לצביעה.

הוסף אורניל אצטט לביומולקולות צביעה, ומספק ניגודיות טובה יותר במהלך המיקרוסקופיה.

לייבש את הרקמה בריכוזים הולכים וגדלים של אתנול ואחריו אצטון.

הטמיעו את הרקמה בשרף, השיגו חלקים דקים במיוחד והעבירו אותם לרשת מיקרוסקופיה.

הכנס נתרן מטא-פריודאט כדי להסיר את האוסמיום טטראוקסיד, לחשוף את החלבון התאי.

התרכובת גם מחמצנת גליקופרוטאין, ויוצרת קבוצות אלדהיד תגובתיות, המנוטרלות על ידי טיפול בגליצין.

הציגו חוצץ חוסם, המונע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הוסף נוגדנים ראשוניים ספציפיים לחלבון המטרה ואחריהם נוגדנים משניים ביוטיניליים.

הוסף נקודות קוונטיות מצומדות סטרפטווידין הנקשרות לביוטין.

תחת מיקרוסקופ אלקטרונים, אזורים המסומנים בנקודות קוונטיות מציגים ניגודיות גבוהה יותר, מה שמסייע ללוקליזציה תת-תאית מדויקת של חלבון המטרה.

לאחר 24 שעות של קיבוע, יש לשטוף את הרקמה במאגר נתרן קקודילאט 0.1 מולארי פעמיים למשך 20 דקות. הסר את הרקמה ממאגר הנתרן קקודילאט וטבול בתמיסת טטרוקסיד אוסמיום 2% למשך 4 שעות בטמפרטורת החדר.

לאחר האוסמוקציה, טבלו את הרקמה בתמיסת נתרן אצטט 2% למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, טבלו את הרקמה בתמיסת אורניל אצטט 2% למשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר צביעת אורניל אצטט, יש לייבש את הרקמה ברצף באמצעות האלכוהולים והאצטון המדורגים.

הטמע את הרקמה המיובשת בשרף אפוקסי בעל צמיגות נמוכה כמתואר בכתב היד. הכניסו את הרקמה לשרף טרי במיקרו-תבניות בגודל 8 מילימטר, תבניות, ורפא את הרקמה המוטמעת ב-70 מעלות צלזיוס למשך הלילה. לאחר מציאת אזור העניין באמצעות סכין אולטרה 45 מעלות, הפק חלקים דקים במיוחד מזהב חיוור. הנח את החלקים הדקים במיוחד הללו בצד המשעמם של רשת נחושת של 200 רשת.

התחל את הצביעה על ידי חשיפת האנטיגן על ידי הנחת 20 מיקרוליטר של תמיסת תחריט נתרן מטאפריודאט על סרט פרפין נקי. הניחו את הרשת המיובשת עם קטעי רקמות על טיפת תמיסת התחריט. השאירו את רשת הקטע על התמיסה למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. שטפו את חלקי הרקמה החרוטים על ידי הנחתם על טיפת מים מזוקקים למשך 60 שניות.

חסום את שאריות האלדהידים על ידי הנחת רשת החתך על טיפה של תמיסת גליצין מולרית של 0.05 למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. כתם את שולי הרשת על נייר סינון כדי להסיר את שאריות תמיסת הגליצין. הנח את רשת החתך ב -10 עד 20 מיקרוליטר של תמיסת חסימה למשך 25 דקות בטמפרטורת החדר.

כתם את קצוות הרשת על נייר סינון, והנח את חלקי הרשת על מדלל נוגדנים למיזוג בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. דגרו על קטעי הרשת עם נוגדן ראשוני למשך שעה ו-30 דקות בתא לח. יבשו את הרשת ושטפו את חלקי הרשת עם מדלל נוגדנים פעמיים למשך 5 דקות כל אחד.

דגרו את קטעי הרשת עם נוגדן משני ביוטיניל למשך שעה אחת בתא לח. לאחר שהרשת מיובשת בכתמים, שטפו את חלקי הרשת עם מדלל נוגדנים פעמיים למשך 5 דקות כל אחד. דגרו את קטעי הרשת ב-QD מצומד סטרפטווידין זמין מסחרית למשך שעה אחת בתא לח בטמפרטורת החדר. מנע חשיפה לאור על ידי כיסוי החדר בנייר אלומיניום. לאחר ייבוש קצוות הרשת באמצעות נייר סינון, שטפו את חלקי הרשת על ידי הנחתם על טיפות מים למשך שתי דקות, וכתמו את שולי הרשת לייבוש.

08:56

להמחיש את האינטראקציה בין התווית על-ידי Qdot חלבונים ו- DNA λ ששונה Site-specifically ברמת מולקולה בודדת

Related Videos

0 Views

11:45

שיטת ה-קריואיפקס לניתוח מיקרוסקופ אלקטרוני של לוקליזציה של חלבון ממברנה בתוך תאים שהשתמרו באופן מבנית

Related Videos

0 Views

06:39

הדמיה קונפוקלית בתפוקה גבוהה של מטרימי ספייק SARS-CoV-2 מצומדים קוונטיים למעקב אחר כריכה ואנדוציטוזיס בתאי HEK293T

Related Videos

0 Views

09:20

ב ההיפוך חלוקה subcellular באתרו של בתאי יונקים חסיד שאינן חסיד

Related Videos

0 Views

05:19

טכניקת אימונופלואורסנציה ללוקליזציה של חלבונים נגיפיים בתאים נגועים

Related Videos

0 Views

11:56

תיוג ההפרש של על פני קרום תא וחלבונים הפנימו לאחר האכלת נוגדן שידורים חיים בתרבית נוירונים

Related Videos

0 Views

09:09

טכניקה ללא תווית להדמית החלל-הזמן של פרשות תא בודדת

Related Videos

0 Views

09:13

Immunofluorescence כמותי מודדים הגלובלי לשפות אחרות תרגום

Related Videos

0 Views

13:08

לוקליזציה כמותית של חלבון גולג'י על ידי הדמיה המסה מרכז של זריחה

Related Videos

0 Views

11:06

צבע רב לוקליזציה מיקרוסקופיה של חלבוני ממברנה בודדת ב- Organelles של תאים בתרבית של חיים

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026