טכניקת תיוג חיסוני כדי לדמיין את לוקליזציה תת-תאית של חלבונים

התחל בשטיפת קטע לב קבוע במאגר נתרן קקודילאט המייצב את מבנה הרקמה. טבלו את הקטע באוסמיום טטרואוקסיד כדי להכתים את שומני הממברנה.

יש לטפל בנתרן אצטט כדי לשמור על pH אופטימלי לצביעה.

הוסף אורניל אצטט לביומולקולות צביעה, ומספק ניגודיות טובה יותר במהלך המיקרוסקופיה.

לייבש את הרקמה בריכוזים הולכים וגדלים של אתנול ואחריו אצטון.

הטמיעו את הרקמה בשרף, השיגו חלקים דקים במיוחד והעבירו אותם לרשת מיקרוסקופיה.

הכנס נתרן מטא-פריודאט כדי להסיר את האוסמיום טטראוקסיד, לחשוף את החלבון התאי.

התרכובת גם מחמצנת גליקופרוטאין, ויוצרת קבוצות אלדהיד תגובתיות, המנוטרלות על ידי טיפול בגליצין.

הציגו חוצץ חוסם, המונע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הוסף נוגדנים ראשוניים ספציפיים לחלבון המטרה ואחריהם נוגדנים משניים ביוטיניליים.

הוסף נקודות קוונטיות מצומדות סטרפטווידין הנקשרות לביוטין.

תחת מיקרוסקופ אלקטרונים, אזורים המסומנים בנקודות קוונטיות מציגים ניגודיות גבוהה יותר, מה שמסייע ללוקליזציה תת-תאית מדויקת של חלבון המטרה.

לאחר 24 שעות של קיבוע, יש לשטוף את הרקמה במאגר נתרן קקודילאט 0.1 מולארי פעמיים למשך 20 דקות. הסר את הרקמה ממאגר הנתרן קקודילאט וטבול בתמיסת טטרוקסיד אוסמיום 2% למשך 4 שעות בטמפרטורת החדר.

לאחר האוסמוקציה, טבלו את הרקמה בתמיסת נתרן אצטט 2% למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, טבלו את הרקמה בתמיסת אור