אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:09 דק׳ • July 8th, 2025
קח את ההקפאה של ביופסיית עור מחולה פרקינסון עטוף במדיום הטבעה.
הרקמה מורכבת מהאפידרמיס החיצוני ביותר, דרמיס בסיסי ושומן תת עורי המועצב על ידי עצבים.
שטפו את החלק כדי להסיר את מדיום ההטבעה. מעבירים אותו לתמיסה חוסמת חדירה, מחלחלת לתאים וחוסמת אתרי קישור לא ספציפיים.
טבלו את החלק בקוקטייל נוגדנים ראשוני כדי להשיג תיוג נוגדנים אחיד, המכונה צביעה צפה חופשית.
הנוגדנים נכנסים לתאי העצב ונקשרים לצברי אלפא-סינוקלאין המפוזרים לאורך האקסונים - צורה מצטברת האופיינית למחלות ניווניות של מערכת העצבים - והידרולאזות קרבוקסיל-טרמינליות.
הכנס נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
טפל בצבע קושר DNA פלואורסצנטי שמכתים את הגרעין.
הניחו את הרקמה על שקופית, מרחו מדיום הרכבה ואטמו בעזרת כיסוי.
תחת מיקרוסקופ קונפוקלי, הקרינה משני הנוגדנים חושפת נוכחות של אגרגטים אלפא-סינוקלאין לאורך האקסונים של נוירונים עוריים.
כדי להתחיל, מלאו חלק מהבארות של צלחת טרייה של 96 בארות ב -100 מיקרוליטר תמיסת כביסה. העבירו את החלקים שיש לנתח מצלחת האחסון לזו המכילה את תמיסת הכביסה. השאירו את החלקים בתמיסת הכביסה למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, העבירו כל חלק לבאר ריקה המכילה את אותה תמיסת כביסה, וחזרו על הכביסה. לאחר מכן, הוסף תמיסת כביסה לחלקים, והעביר אותם לבארות חדשות המכילות 100 מיקרוליטר של תמ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים