אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:57 דק׳ • July 8th, 2025
מניחים צלחת תרבית עם עוברי דג זברה משובצים באגרוז על במת מיקרוסקופ.
קח תמיסת צבע המכילה ריכוז נמוך של מצומדים של נוגדנים, הנושאת נוגדן אדום עם תווית פלואורסצנטית ונוגדנים נגד DeltaD.
הזרקו את תמיסת הצבע לחדר המוח האחורי של העובר, תוך התמקדות באבות גליה רדיאליים או RGPs.
שחרר את העובר המוטבע ושחזר אותו במדיום עשיר בחומרים מזינים.
במהלך ההתאוששות, מצומדים פלואורסצנטיים מקיימים אינטראקציה עם כמה מולקולות דלתא של ליגנד Notch ב-RGP, ויוזמים הפנמה והיווצרות אנדוזום.
הריכוז המצומד הנמוך מאפשר לליגנדים הלא קשורים של DeltaD לקיים אינטראקציה עם קולטן ה-Notch, ולהפעיל את מסלול האיתות Notch ב-RGPs.
לאחר ההחלמה, העבירו עובר מורדם עם אגרוז לצלחת זכוכית כשהצד הגבי שלו כלפי מטה לצורך הדמיה.
בצע הדמיה פלואורסצנטית בזמן-lapse כדי ללכוד את חלוקת התא, המציגה חלוקה אסימטרית של אנדוזומים פלואורסצנטיים המכילים DeltaD לשני תאי בת, המאשרת את הפעלת איתות Notch/DeltaD.
הכניסו את העוברים המוטבעים מתחת לסטריאומיקרוסקופ וכסו את האגרוז במי ביצים. הגדר את מזרק לחץ האוויר עם מיקרומניפולטורים, והנח אותם קרוב למיקרוסקופים. השתמש בבלון גז הפלדה המכיל חנקן גזי בלחץ גבוה כמשאב האוויר.
לאחר שהעוברים הורכבו באגרוז, פתח את שסתום הגז. תוך כדי שימוש במודול המילוי הקדמי של המיקרו-מזרק, טען קדימה את מחט הזכוכית המוכנה עם 2 מי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים