אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:38 דק׳ • July 8th, 2025
קח שקופית עם בארות תגובה המכילות חלקים דקים של רקמות צמחים שונות. הרקמות מקובעות ומוטבעות בתוך שרף לצביעה חיסונית.
הנח את המגלשה בתוך תא דגירה חשוך ולח כדי למנוע חשיפה לאור ואידוי מגיב במהלך השלבים הבאים.
הציגו תמיסת חסימה למניעת אינטראקציה לא ספציפית של נוגדנים.
שטפו כדי להסיר תמיסת חסימה עודפת, ולאחר מכן הוסיפו נוגדנים ראשוניים ספציפיים לאנטיגן ודגרו.
הנוגדנים נקשרים לאנטיגנים היעד שלהם, כלומר חלבוני ארבינוגלקטן ופקטינים בדופן התא.
הכנס נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור, הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
שטפו כדי להסיר את הנוגדנים הלא קשורים, ומרחו צבע פלואורסצנטי שנקשר לתאית, ומסמן את דופן התא.
הוסף אמצעי הרכבה ואטום עם כיסוי.
תחת מיקרוסקופ, פלואורסצנטיות מהצבע והנוגדנים הקשורים מסייעים בהדמיית תאית בדפנות תאי הצמח המשולבים עם חלבוני ארבינו-גלקטן או פקטין, ומציגים את התפלגותם הספציפית לרקמה.
כדי להכין תא דגירה לשקופיות התגובה, הניחו כמה מגבות נייר לחות, בתחתית קופסת קצות פיפטה ועטפו את הקופסה בנייר אלומיניום. העבירו את השקופיות מהקופסה לתא הדגירה. פיפטה 50 מיקרוליטר של תמיסת חסימה לכל באר. לאחר דגירה של המגלשה למשך 10 דקות, הסר את תמיסת החסימה. לאחר מכן, שטפו את כל הבארות פעמיים עם PBS למשך 10 דקות בכל פעם. לאחר הכנת תמיסות הנוגדנים העיקריות כמתואר בכתב היד, בצע שטיפה אחרונה של הבארות
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים