לכידה חיסונית וציטומטריית זרימה של שלפוחיות חוץ-תאיות לאפיון אנטיגני

התחל עם צינור הנושא חלקיקים הקשורים לממברנה שמקורם בתאים הנקראים שלפוחיות חוץ-תאיות, או EVs, המציגים הרכבים אנטיגניים ייחודיים.

הציגו ננו-חלקיקים מגנטיים, MNPs, המכילים נוגדנים ללכידה מצומדים עם שברי Fab עם תווית פלואורסצנטית.

דגירה כדי להקל על האינטראקציה בין ה-MNPs עם אנטיגנים ספציפיים של EVs, ויוצרים מתחמי MNP-EV.

הוסף אימונוגלובולין-G כדי לחסום אתרי קשירה של Fc, ולאחר מכן הכנס נוגדנים לזיהוי עם תווית פלואורסצנטית כדי להכתים אנטיגנים אחרים על החלקיקים שנלכדו.

טען את התערובת הזו על עמוד מגנטי שטוף מראש המונח במפריד מגנטי.

השדה המגנטי שומר על חלקיקים שנלכדו על ידי MNP בתוך העמודה. החלף את המאגר כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

אחזר את העמודה מהמפריד המגנטי, סלק חלקיקים שנלכדו ב-MNP עם מאגר, ותקן אותם כדי לשמור על שלמותם המבנית.

לנתח את החלקיקים שנלכדו על ידי זרימה ציטומטרית; אותות פלואורסצנטיים מובהקים מאנטיגנים מוכתמים מתאמים עם מאפיינים אנטיגניים ייחודיים של EVs.

התחל בשילוב של 60 מיקרוליטר של MNPs לכל מצב ו-5 מיקרוליטר של שברי Fab מסומנים ספציפיים לאיזוטיפ של נוגדן הלכידה המעניין בצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר. דוגרים את התמיסה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות בערבוב רציף. לאחר מכן, הרטיבו מראש רכז 100k עם 300 מיקרוליטר PBS, וסובבו את הרכז במיקרו-צנטריפוגה.

בתום הצנטריפוגה, יש ל