אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:49 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת רב-באר עם פילטרים בבסיס.
הוסף דגימת בדיקה המכילה ציטוקינים שונים.
הוסף קבוצות שונות של מיקרוספירות המובחנות על ידי גודל ועוצמת הקרינה הפנימית.
כל קבוצה מצומדת לנוגדנים המכוונים לציטוקין ספציפי.
דגרו את הצלחת בחושך תחת תסיסה.
הנוגדנים נקשרים לציטוקיני המטרה שלהם, ומשתקים אותם על המיקרוספרות.
החל ואקום כדי להסיר את הציטוקינים הלא קשורים. ציטוקינים הקשורים למיקרוספרה נשמרים בשל גודל הנקבוביות הקטן יותר של הממברנה.
הוסף קוקטייל של נוגדנים לזיהוי מצומדים לביוטין הנקשרים לציטוקינים הקשורים למיקרוספרה.
הוסף סטרפטווידין מצומד פלואורסצנטי ודגירה בחושך תחת תסיסה. סטרפטווידין נקשר לביוטין, ומשתק את המדווח על קומפלקס המיקרוספרה.
הסר מולקולות לא קשורות והשהה מחדש את המיקרוספרות.
באמצעות ציטומטריית זרימה, זהה את הציטוקינים הקשורים על ידי קביעת הגודל והפלואורסצנטיות הפנימית של המיקרוספרות.
כדי לקבוע את הכמות של ציטוקין ספציפי, מדוד את עוצמת הקרינה של המדווח.
כדי לבצע את הבדיקה, אפשר לכל הריאגנטים להתחמם לטמפרטורת החדר לפני השימוש.
לוחות סינון פוליפרופילן משמשים בהדגמה זו. חיוני לחלוטין שהצלחת תישמר זקופה במהלך כל הליך הבדיקה, כולל שלבי הכביסה, כדי למנוע אובדן החרוזים.
הרטיבו מראש את נייר הסינון על ידי הוספת 100 מיקרוליטר של מאגר כביסה 1x לכל באר, ותנו לצלחת לשבת דקה אחת בטמפרטורת החדר. הס
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים