אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:39 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת מרובת בארות המכילה תאי יונקים עטופים במערכת הידרוג'ל המחקה את סביבת המטריצה החוץ-תאית הטבעית.
הסר את מדיום התרבות. טפל עם מאגר קיבוע כדי להצליב את החלבונים, תוך שמירה על שלמות התא.
הוסף תמיסה המכילה חומר ניקוי כדי לחלחל את קרום התא.
הציגו פתרון חוסם למניעת קשירת נוגדנים לא ספציפיים בשלבים הבאים.
הוסף קוקטייל נוגדנים ראשוני שנכנס לתאים ונקשר במיוחד לחוטי ביניים ציטופלזמיים ולגורם שעתוק המטרה.
הסר את הנוגדנים הלא קשורים. הציגו נוגדנים משניים עם תווית פלואורסצנטית וכתם גרעיני כדי לתייג את ה-DNA באופן פלואורסצנטי.
הסר את המולקולות הלא קשורות.
הרכיב את תרבות ההידרוג'ל על מגלשה באמצעות מדיום הרכבה.
השתמש במיקרוסקופ קונפוקלי כדי להתבונן בתאים המוכתמים במערכת החיסון.
ראשית, שאפו את המדיום מכל באר. לאחר מכן, שטפו את הבארות עם 1 מיליליטר DPBS חם. לאחר סיום הכביסה, הוסף 750 מיקרוליטר של תמיסת קיבוע לכל באר. לאחר מכן, דגרו את צלחת 24 הבארות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לאחר הדגירה יש לשאוב את תמיסת הקיבוע מכל אחת מהבארות, ולהשליך את הקיבוע למיכל פסולת מסוכנת. לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של DPBS לדגימה והשליך מיד את ה-DPBS למיכל פסולת מסוכנת.
לאחר מכן, הוסף 750 מיקרוליטר של תמיסת חדירות כדי לחדור את הדגימה למשך שעה בטמפרטורת החדר על הנדנדה, ב -15 סיבובים לדקה. לאחר שעה, שאפו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים