אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:59 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם תאי אריתרובלסט אנושיים דבוקים.
הציגו צימודים של נוגדנים שמקורם בווירוסים ועברו שינוי פפטיד. צימודים אלה מכילים רצף לוקליזציה גרעיני, או NLS, מהנגיף, ושאריות חומצה כולית.
במהלך הדגירה, הנוגדנים המצומדים מקיימים אינטראקציה עם קולטני פני התא ומפנימים בתוך האנדוזומים.
החומצה הכולית במצומד עוזרת לברוח מהתא האנדוזומי, ומאפשרת הצטברות תוך תאית, בעוד חלבוני ההובלה וה-NLS מקלים על לוקליזציה גרעינית שלהם.
הציגו טריפסין וחוצץ המכיל EDTA כדי לנתק את התאים ולהסיר צימודים הקשורים למשטח.
יש להוסיף חומר מועשר בסרום כדי לעכב את פעילות הטריפסין.
צנטריפוגה לאיסוף התאים; לתקן ולחדור אותם.
הכנס נוגדנים משניים אדומים רחוקים המסומנים בפלואורופור, הנקשרים למצומדים מקומיים ולשטוף.
טפל בצבע מכתים גרעיני.
התבוננו תחת מיקרוסקופ קונפוקלי וצלמו תמונות בעומקים מישוריים שונים.
לאחר עיבוד התמונה, התא מראה מוקדים פלואורסצנטיים ירוקים קטנים בתוך הציטופלזמה והגרעין, המאשרים את ההתפלגות התוך-תאית של צימודי נוגדנים.
טפל בתאי יעד TF-1a עם 200 ננו-מולרי 7G3-חומצה כולית-נוגדנים מצומדים. כלול תאים שטופלו בנוגדנים חד שבטיים בקרה שונה. דגרו 5 x 106 תאים חיוביים לאנטיגן עם המצומדים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר מכן הסר את הסופרנטנט והשתמש במיליליטר אחד של PBS קר כקרח כדי לשטוף את התאים שלוש פעמים.
מוסיפי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים