עירוי מבוקר של נוגדנים ספציפיים לפפטידים Aβ ואוליגומרים Aβ לתוך היפוקמפוס החולדה

קח חולדה ערה עם שתי צינוריות מנחות שהושתלו דו-צדדית בהיפוקמפוס.

הצינוריות מחוברות למשאבות אוסמוטיות מושתלות תת עוריות המכילות נוגדנים ספציפיים לעמילואיד-בטא או Aβ ובקרה, בהתאמה.

ריכוז נוגדנים גבוה בתוך המשאבה גורם לדיפוזיה של מים מהרקמה שמסביב דרך הממברנה החיצונית החדירה למחצה, ומרחיב את השכבה האוסמוטית.

התפשטות זו דוחסת את מאגר הנוגדנים, ומאפשרת שחרור מבוקר של נוגדנים.

חבר שתי צינוריות פנימיות לצנתרים סטריליים מלאים במים המחוברים למשאבת עירוי.

מלאו את הצינורית במים.

לאחר מכן, שאפו נפח קטן של אוויר וצרו בועה.

כעת, מלאו את הצינוריות באוליגומרים Aβ נוירוטוקסיים, אגרגטים מסיסים של פפטידי Aβ.

הכנס את הצינורית הפנימית לתוך צינורית ההנחיה. הפעל את המשאבה לאספקה מבוקרת של האוליגומרים, תוך שימוש בבועת האוויר כדי למנוע זרימה חוזרת ולעקוב אחר קצב העירוי.

יש לתת זריקות אוליגומרים חוזרות ונשנות למשך הזמן הנדרש.

המודל מוכן לחקר אינטראקציות Aβ אוליגומר-נוגדנים.

יום אחד לפני ההתקנה, מלאו את המשאבות האוסמוטיות בנוגדנים 6E10 או שלטו בנוגדני IgG1 בהתאם להוראות היצרן. הניחו את המשאבות במים מזוקקים סטריליים ושמרו על 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה כדי להפעיל את המשאבות.

לאחר שהחולדה הורדמה עם 3% איזופלורן וגילחה בין השכמות, יש לחטא את העור בתמיסה של 2% כלורהקסידין גלוקונאט ו-2% אלכוהול איזופרופיל. לאחר ביצוע חתך של 2 סנטימטרים עם אזמל בין השכמות, אתר את צנתרי PE-50 המחוברים לצינורית המנחה.

לאחר מכן, חותכים את קצות הצנתרים PE-50 המכילים מלט דנטלי בעזרת אזמל. חבר את המשאבות האוסמוטיות לצנתרי PE-50 והוסף מעט מלט דנטלי בצומת המשאבה והצנתר כדי לאבטח את החיבור. לבסוף, תפר את העור בחוזקה עם תפרים 4/0. החזירו את החיה לכלוב שלה על כרית חום חמה, ועקבו אחריה כשהיא מתעוררת מהרדמה איזופלורן.

לאחר הכנת תמיסת האוליגומר עמילואיד-בטא כפי שדווח קודם לכן, אפשר לתמיסה להצטבר באופן דינמי וספונטני למשך שעה בטמפרטורת החדר לפני העירוי. לאחר מכן, מלאו כל מזרק ב-5 מיקרוליטר מים מזוקקים סטריליים.

לאחר מכן, חתכו שני צנתרים PE-50 לאורך של כ-60 סנטימטרים בעזרת אזמל. השתמש בשני מזרקים של 1 מיליליטר המצוידים במחטים בגודל 21 כדי למלא את שני הצנתרים במים מזוקקים סטריליים. בעוד המזרקים של 1 מיליליטר נשארים במקומם, בקצה אחד של כל קטטר, חבר את הקצוות החופשיים למזרקי המילטון. הסר את המזרקים של 1 מיליליטר ובדוק שאין בועות אוויר בצנתרים.

הכנס את הצינורית הפנימית בקצה צנתרי PE-50. השתמש במזרקי המילטון כדי למלא כל צינורית פנימית עד 1 מיקרוליטר, ולאחר מכן, צור בועת אוויר על ידי משיכת הבוכנה לאחור לסימון 2 מיקרוליטר.

כעת מערבבים את תמיסת העמילואיד-בטא אוליגומר על ידי פיפטינג למעלה ולמטה באמצעות קצה של היצמדות מינימלית. הימנע מהיווצרות בועות במהלך הערבוב. לאחר מכן, מלאו את שתי הקנולות הפנימיות ב-1.5 מיקרוליטר של תמיסת עמילואיד-בטא אוליגומר על ידי משיכת הבוכנות בחזרה ל-3.5 מיקרוליטר.

לאחר מכן, סמן קווים לפני ואחרי בועת האוויר בשני הצנתרים. זה משמש כמחסום של עירוי מתמשך. הנח את החולדה הערה באחיזת התכרבלות ושתק את ראשה. הסר את צינורית הדמה מהצינורית הדו-מדריכה, ולאחר מכן הכנס את הצינורית הפנימית שהוכנה קודם לכן לתוך צינורית המדריך. ודא שהם מוכנסים במלואם ומקובעים היטב לבסיס צינורית המדריך. כעת, שחררו את החולדה מאחיזת ההתכרבלות, והחזירו אותה לכלוב שלה כדי להגביל את לחץ הטיפול.

הפעל את משאבת העירוי והזריק 1 מיקרוליטר של תמיסת אוליגומר עמילואיד-בטא בקצב של 0.1 מיקרוליטר לדקה. במהלך העירוי, בדוק שבוכנת המזרק נעה מ-3.5 מיקרוליטר ל-2.5 מיקרוליטר, וכי בועות האוויר בשני צנתרי PE-50 נעות ברציפות. בדוק את החולדה כדי לוודא שהצנתרים אינם מתפתלים זה לזה.

השאירו את הצינורית הפנימית במקומה למשך 5 דקות נוספות לאחר העירוי כדי לאפשר דיפוזיה יעילה של תמיסת עמילואיד-בטא אוליגומר. לאחר העירוי, החזירו את החולדה לאחיזת ההתכרבלות, והסירו את הצינורית הפנימית ואת הצינורית המכוונת כדי למנוע ריפלוקס של התמיסה המוזרקת. הנח צינורית דמה שנעצרה ממש לפני זרוע הזווית של צינורית המדריך. לבסוף, החזירו את החיה לכלוב שלה.