בדיקת מבחנה למדידת פגוציטוזה תאית תלוית נוגדנים על ידי פגוציטים

קחו מיקרוספירות עם תווית פלואורסצנטית המצומדות לאנטיגן מעניין. האנטיגנים המשותקים קשורים לנוגדנים ספציפיים לאנטיגן.

הוסף לויקוציטים, כולל לימפוציטים שאינם פגוציטים, גרנולוציטים פגוציטים ומונוציטים. דגירה על התערובת בתנאים פיזיולוגיים.

אזור ה-Fc של הנוגדן המשותק נקשר לקולטן ה-Fc בפגוציטים, ומפעיל פגוציטוזיס תאי תלוי נוגדנים, או ADCP.

צנטריפוגה כדי לגלול את התאים ולהשליך את הסופרנטנט המכיל מיקרוספירות לא מופנמות.

הוסף כתם כדאיות שנכנס לתאים מתים, ותייג אותם באופן פלואורסצנטי.

צנטריפוגה כדי לגלול את התאים ולהסיר את הסופרנטנט.

הוסף נוגדנים עם תווית פלואורסצנטית הנקשרים ללויקוציטים.

צנטריפוגה כדי להשליך את הסופרנטנט ולקבע את התאים.

באמצעות ציטומטריית זרימה, ראשית, הסר את התאים המתים החיוביים לכתם כדאיות.

לאחר מכן, בחר את הלויקוציטים הקיימים והבחין בין גרנולוציטים, מונוציטים ולימפוציטים על סמך תכונות הגרגיריות והפיזור שלהם.

מדוד את עוצמת הקרינה של התאים הפגוציטים החיוביים למיקרוספירה כדי לכמת את פעילות ה-ADCP שלהם.

לבדיקת ADCP, הפוך במהירות את צלחת ה-ADCP המוכנה כדי לשפוך את הסופרנטנט לאחר הצנטריפוגה הסופית, והוסף 5 x 10⁴ תאי חלב אם מבודדים טריים ב-200 מיקרוליטר PBS בתוספת BSA לדגירה של שעתיים ב-37 מעלות צלזיוס.

בתום הדגירה יש לצנטריפוגה של התאים, ולשטוף את הכדורים פעמיים ב-200 מיקרוליטר