אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:24 דק׳ • July 8th, 2025
קח צינור המכיל תרחיף של חיידקי מעיים אנושיים.
הוסף חלקיקים דמויי וירוס נורו-וירוס אנושי, או VLPs. ה-VLPs מכילים קפסיד ויראלי שלם אך חסר RNA גנומי, מה שהופך אותם ללא מדבקים לבני אדם.
במהלך הדגירה, חלבוני הקפסיד VLP נקשרים לפחמימות ספציפיות המתבטאות על פני השטח של החיידקים, ויוצרים קומפלקסים של חיידקי VLP.
צנטריפוגה כדי לגלול את הקומפלקסים ולהשליך את ה-VLPs הלא קשורים.
הציגו תמיסת חסימה המכילה חלבון כדי לחסום אתרי קשירת נוגדנים לא ספציפיים, ולהפחית את צביעת הרקע בשלבים הבאים.
הוסף נוגדנים ספציפיים ל-VLP עם תווית פלואורסצנטית ודגירה.
הנוגדנים נקשרים לאתרי המטרה שלהם בקפסיד ה-VLP, ומסמנים את קומפלקסי חיידקי ה-VLP.
צנטריפוגה לגלולה את המתחמים. השליכו נוגדנים לא קשורים והשעו מחדש את הגלולה במאגר זרימה ציטומטרית.
באמצעות ציטומטר זרימה, זהה אותות פלואורסצנטיים הנפלטים על ידי קומפלקסים של חיידקי VLP, המאפשרים לכמת את אחוז החיידקים הקשורים בדגימה.
לאחר הכנת הריאגנטים, הנוגדנים והחיידקים כמתואר בכתב היד, הרכיבו את כל החומרים בארון בטיחות ביולוגית BSL II.
חלקיקים דמויי וירוס לנורו-וירוס אנושי רשומים כפתוגנים BSL II, וכל העבודה המבוצעת באמצעות VLPs צריכה להתבצע בארון בטיחות ביולוגית מוסמך.
הוסף 10 מיקרוגרם של VLPs נורו-וירוס אנושי לכל צינור של חיידקים, וערבב היטב על ידי פיפטינג. דגרו את הצינורו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים