טכנולוגיית Snap Chip לאימונואסאי סנדוויץ' מרובב ללא תגובתיות צולבת
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:36 דק׳ • July 8th, 2025
התחל בהרכבת שקופית בדיקת מיקרו-מערך שטופלה מראש עם נקודות מובהקות המכילות נוגדנים ללכידה ספציפיים לחלבון לזיהוי חלבונים מרובים.
טען את הדילולים של תקן החלבון ואת דגימות הסרום המדוללות מראש לבארות נפרדות. דילולים אלה יוצרים טווח של ריכוזי חלבון לכימות מדויק.
דגירה כדי להקל על אינטראקציות חלבון-נוגדנים. שוטפים כדי להסיר חלבונים לא קשורים, לפרק ולייבש את השקופית.
הפוך את שקופית הבדיקה במנגנון הצמד המכיל שקופית העברה מיובשת המנוקדת בנוגדני זיהוי ביוטיניליים ספציפיים לחלבון באותם מיקומים כמו שקופית הבדיקה.
סגור את המכשיר ולחץ כדי להצמיד את השקופיות זו על זו. זה מקל על העברת נוגדני הזיהוי לנקודות המתאימות בשקופית הבדיקה, וממזער את התגובתיות הצולבת.
הפרד את השקופיות כדי לאפשר אינטראקציה של נוגדנים לזיהוי עם חלבונים קשורים, היוצרים אימונוקומפלקסים.
הרכיבו מחדש את שקופית הבדיקה, שטפו אותה והציגו סטרפטווידין מצומד פלואורופור, תוך אינטראקציה עם נוגדנים ביוטיניים.
באמצעות סורק, זהה כתמי פלואורסצנטיות במקומות שונים, מה שמעיד על מספר חלבונים בדגימת הסרום. השווה את עוצמות הכתמים לסטנדרט לכימות חלבון.
כדי להתחיל בבדיקה החיסונית, הוציאו את שקופית הבדיקה המוכנה מהמקפיא והניחו לה להתחמם לטמפרטורת החדר בשקית האטומה שלה למשך 30 דקות. הכן שבע תמיסות מדוללות סדרתיות של חלבונים ב- PBS עם 0.05% פוליסורבט-2
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים