אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:01 דק׳ • July 8th, 2025
קח קריוסקציה של רקמת קרצינומה של תאי כליה המציגה תאי CD8+ T חודרים במיקרו-סביבת הגידול שלה.
טפל בזה באצטון כדי לתקן ולחלחל את הרקמה. שוטפים כדי להסיר עודפי אצטון.
הוסף אבידין כדי להרוות ביוטין של רקמות אנדוגניות. לאחר מכן, הוסיפו ביוטין כדי לחסום אתרי קשירת אבידין משותקים, ולמזער אינטראקציות לא ספציפיות.
יש למרוח סרום המכיל אימונוגלובולינים כדי לחסום קולטני Fc של תאי חיסון, ולמנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.
הוסף קוקטייל נוגדנים ראשוני המכוון ל-CD8, סמן תאי T ציטוטוקסי, ו-PD-1 ו-Tim-3, קולטנים מעכבים המתבטאים על ידי תת-אוכלוסיות תאי CD8+ T עמידות לאימונותרפיה.
להציג נוגדנים משניים מובהקים המסומנים בפלואורופור המכוונים לנוגדנים נגד CD8 ואנטי-Tim-3.
הוסף נוגדנים משניים ביוטיניליים המכוונים לנוגדנים נגד PD-1 וסטרפטווידין אחר המסומן על ידי פלואורופור המקשר לביוטין.
מרחו מדיום הרכבה המכיל צבע על גרעיני התאים מכתימים והניחו כיסוי.
רכוש תמונות פלואורסצנטיות מולטי-ספקטרליות כדי לזהות את תאי ה-CD8+ T החודרים לגידול ואת תת-האוכלוסיות העמידות לאימונותרפיה המבטאות PD-1, Tim-3 או שניהם.
לאחר ההפשרה, השתמש במגבת נייר כדי לייבש בזהירות את השקופיות סביב חלקי הרקמה, והקיף את הרקמות בעט מחסום הידרופובי. כאשר המחסום התייבש, תקן את הדגימות ב-100% אצטון למשך 5 דקות, ולאחר מכן 2 דקות של ייבוש באוויר. לאח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים