אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:19 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם שקופית המכילה תאי מארח דבוקים.
הוסף וירוסים ואפשר להם להיכנס לתאי המארח.
הסר את המדיום המושקע. הוסף מדיום טרי כדי לאפשר סינתזה והובלה של חלבון נגיפי.
השתמש בפרפורמלדהיד כדי לשמר את המורפולוגיה של התא ואת מיקום החלבון.
הוסף מולקולות דטרגנט כדי להפוך את התאים לחדירים.
החל מאגר חוסם כדי לחסום אתרי איגוד שאינם יעד.
הוסף נוגדנים ראשוניים הנקשרים לחלבונים נגיפיים מטרה. הסר נוגדנים לא קשורים.
שכבת נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור אדום לתיוג פלואורסצנטי של החלבונים הנגיפיים. הסר נוגדנים לא קשורים.
הוסף מדיום הרכבה פלואורסצנטי המכיל צבע גרעיני כדי להכתים את הגרעינים.
באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית, התבונן במיקומם של חלבונים נגיפיים אדומים-פלואורסצנטיים וגרעיני מארח כחולים-פלואורסצנטיים.
אות אדום חזק יותר סביב האזור הכחול מצביע על לוקליזציה ציטופלזמית, בעוד שאות חזק יותר מבפנים מרמז על לוקליזציה גרעינית.
רמות אות שוות באזור הכחול ובסביבתו מצביעות על כך שחלבונים ממוקמים גם בגרעין וגם בציטופלזמה.
20 עד 24 שעות לפני ההדבקה בנגיף, זרעו 5 x 104 תאי פיברובלסטים עובריים אנושיים או HEL לכל באר על מגלשה מדורגת של 4 בארות 11 מילימטר במצע הגידול לדגירה לילית ב-37 מעלות צלזיוס, עם 5% פחמן דו חמצני.
חשוב לנענע את המגלשה ביסודיות כדי להבטיח פיזור אחיד של התאים תוך הקפדה על מניעת שפיכת מדיום התרבית
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים