שיטת מבחנה לזיהוי תאים חיסוניים מולדים ונרכשים השוכנים בריאות עכברים

קח רקמת ריאה של עכברים טחונים במאגר עיכול ודגירה בטמפרטורה פיזיולוגית.

אנזימי חיץ מפרקים את מטריצת הרקמות, ומשחררים את התאים.

טריטוראט כדי לנתק את המסה התאית, ולסנן את התרחיף באמצעות מסננת כדי לבודד את התאים הבודדים.

צנטריפוגה להסרת הסופרנטנט עם פסולת רקמות. דגרו את התאים עם מאגר ליזה כדי ליז את כדוריות הדם האדומות.

צנטריפוגה כדי להשליך את הסופרנטנט המכיל פסולת תאית. השעו מחדש את התאים והעבירו אותם למיקרו-צלחת.

הוסף נוגדנים כדי לחסום את קולטני ה-Fc, ולמנוע כתמים ברקע.

הציגו קוקטייל נוגדנים עם תווית פלואורופור המכוון לסמני שטח ספציפיים על תאי החיסון המולדים - מונוציטים, מקרופאגים, תאים דנדריטיים, תאי הרג טבעיים, נויטרופילים, אאוזינופילים ותאי חיסון נרכשים - לימפוציטים B ו-T.

תקן וחלחל את התאים. הוסף נוגדנים עם תווית פלואורופור ספציפיים לסמן תוך-תאי על מונוציטים, מקרופאגים, תאים דנדריטיים ואאוזינופילים.

בעזרת ציטומטריית זרימה, סווג את תאי החיסון המסומנים

מעבירים את הריאה לצלחת פטרי. טוחנים אותו בעזרת שני אזמלים עדינים, ואז מניחים אותו בצינור חרוטי של 50 מיליליטר. הוסף 5 מיליליטר חיץ עיכול כדי לשטוף את הצלחת. אבטח את מכסה הצינור, ועכל את הריאה במשך 30 דקות על שייקר אורביטלי במהירות של 150 סיבובים לדקה ב-37 מעלות צלזיוס. עצור את התגובה על ידי הוספת 10 מיליליטר של מאגר BSA קר.

לאחר העיכ