השפעת אספירין ואיבופרופן על היכולת הפאגוציטית של מקרופאגים

התחל עם תרחיף פטרייתי של קריפטוקוקוס. הוסף תמיסה של חלקיקים ביולוגיים שמקורם בפטריות מצומדים בצבע פלואורסצנטי רגיש ל-pH כדי להכתים את תאי הקריפטוקוקוס.

שטפו כדי להסיר את הצבע הלא כרוך. העבירו את התרחיף הפטרייתי המוכתם לצלחת מרובת בארות עם מקרופאגים דבוקים - או תאי חיסון פגוציטים.

הציגו את הריכוז המעכב המינימלי של תרופה, כגון אספירין או איבופרופן, ודגרו כדי להקל על ספיגת התרופה.

מולקולות התרופה מקיימות אינטראקציה עם ציקלואוקסיגנאז-2 - אנזים המסנתז פרוסטגלנדין, ומעכב את פעילותו.

זה מונע המרה של חומצה ארכידונית לפרוסטגלנדין, שומר על רמות cAMP תוך תאיות ומשפר את היכולת הפגוציטית של המקרופאגים, מה שמקל על הפנמת פטריות.

הפגוזום המכיל פטריות מתמזג עם הליזוזום - אברון חומצי, יוצר פגוליזוזום עם pH חומצי ומאפשר לצבע להאיר.

תאים שטופלו בתרופות מציגים פלואורסצנטיות גבוהה יותר מאשר תאים לא מטופלים, מה שמרמז על יעילות התרופה בשיפור היכולת הפגוציטית של מקרופאגים.

התחל בתרבית של קו תאי המקרופאגים של העכבר, שגדל במדיום RPMI 1640 שלם, כמתואר בפרוטוקול הטקסט.

בנוסף, הכינו תרבית של Cryptococcus neoformans המושעה ב-PBS לריכוז הרצוי, כפי שהוזכר בפרוטוקול הטקסט.

כדי להכתים את תאי הקריפטוקוק בכתם הפגוציטוזיס, הוצא 999 מיקרוליטר מהתאים לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה. הוסף 1 מיקרוליטר מהכתם לצינור. דגרו את התאים למשך שעה בטמפרטורת החדר, בחושך, בתסיסה איטית.

לאחר הדגירה יש לשטוף את התאים על ידי צנטריפוגה ראשונה. לאחר מכן, השליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים עם PBS וחזרו על שלב הכביסה פעמיים נוספות.

הוצא 100 מיקרוליטר של תרחיף תאי Cryptococcus neoformans לבארות של צלחת 96 הבארות המכילה את המקרופאגים המתורבתים.

כדי לחקור את השפעת תרופות הבדיקה על פגוציטוזיס מקרופאגים, החלק 100 מיקרוליטר של תרופת הבדיקה הרצויה לבארות מתאימות של צלחת 96 הבארות כמתואר בפרוטוקול הטקסט.

דגרו את הצלחת בחממת פחמן דו חמצני למשך שעתיים עד 6 שעות. בסוף הדגירה יש למדוד את הקרינה מהכתם הפגוציטי.