אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:05 דק׳ • December 23rd, 2025
קח דילולים סדרתיים של נוגדנים ספציפיים לציטומגלווירוס אנושי, או HCMV.
עם הוספת HCMV, הנוגדנים נקשרים לגליקופרוטאין B על המעטפת הנגיפית, ומנטרלים את הנגיף.
מעבירים את התערובת לפיברובלסטים אנושיים ומדגרים.
קומפלקס גליקופרוטאין טרימר על הנגיפים הלא מנוטרלים נקשר לקולטנים תאיים ספציפיים, מפעיל היתוך קרום מארח וירוס בתיווך גליקופרוטאין B ומשחרר את הנוקלאוקפסיד המכיל DNA גנומי בפנים.
הגנום המשוחרר נכנס לגרעין, ומקודד חלבונים מקומיים גרעיניים מיד מוקדם, או IE.
נטרול נוגדנים מונע כניסה ויראלית לתאים.
הסר את הווירוסים הלא מופנמים. טפל באתנול בטמפרטורה מתחת לאפס כדי לתקן ולחלחל את התאים.
הציגו נוגדן ראשוני שנקשר לחלבוני IE.
הוסף נוגדן משני מצומד פלואורופור שנקשר לנוגדנים הראשוניים וכתם פלואורסצנטי שנקשר ל-DNA.
תחת מיקרוסקופ, זהה תאים בעלי כתמים כפולים הנגועים בנגיף. חשב את אחוז התאים הנגועים כדי לקבוע את נטרול הנגיף בריכוזי הנוגדנים השונים.
ביום שלפני הניסוי, הכינו תאי מטרה לזיהום על ידי תרבית תאי פיברובלסטים, הגדלים במצע שלם, המורכב מ-DMEM בתוספת 10% FBS, בצלחת סטרילית של 96 בארות.
לאחר 24 שעות, הכינו את תערובת הנגיף-נוגדנים על ידי הוספת 90 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים מדוללת לבארות של צלחת טרייה של 96 בארות. הכן דילולים סדרתיים של תמיסת נוגדנים באמצעות מדיה מלאה.
בנוסף, הוסף 60 מיקרוליטר של
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים