הליך STAGE TIP להתפלה וטיהור של פפטידים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:43 דק׳ • January 15th, 2026
קח STop And Go Extraction או STAGE Tip, עמודת טיהור ממוזערת.
הקצה מכיל חרוזי סיליקה קטנים הקשורים לשרשראות פחמימנים ארוכות לטיהור פפטידים מבוסס אינטראקציה הידרופובית.
שוטפים עם מאגרים המכילים אחוז גבוה של אצטוניטריל, ומסירים זיהומי שרף.
הציגו מאגר מחייב וצנטריפוגה, מאזנים את העמודה לקשירת פפטידים אופטימלית.
טען דגימת פפטיד מעוכלת מראש שהתקבלה מתאים דמויי נויטרופילים מובחנים, המכילים שברי פפטידים וזיהומים, כולל מלחים.
צנטריפוגה כדי להעביר את הדגימה דרך העמודה. שברי הפפטיד נקשרים לשרשראות הפחמימנים באמצעות אינטראקציות הידרופוביות, בעוד שהמלחים מוסרים.
הוסף את מאגר הכריכה והצנטריפוגה, והסר את הזיהומים שנותרו.
הציגו את המאגר הגבוה המכיל אצטוניטריל לפליטה.
בעזרת מזרק, העבירו את המאגר דרך העמודה. אצטוניטריל נקשר לשרשראות הפחמימנים, ומעביר את שברי הפפטיד הנפלטים עם המאגר.
בצע פרופיל פרוטאומי כדי לזהות את הפפטידים המטוהרים.
כדי להתחיל, ארזו שלוש שכבות של שרף C18 בקצה פיפטה של 200 מיקרוליטר כדי לבנות קצה STop And Go Extraction או STAGE עבור כל דגימת פפטיד.
עצור את העיכול האנזימטי של דגימות הפפטיד שהודגרו בעבר על ידי הוספת 1 על 10 נפחים של תמיסת עצירה. צנטריפוגה של הדגימות ב-13,200 סל"ד למשך 10 דקות ומעבירה את הסופרנטנט לצינור חדש של 2 מיליליטר.
לאחר מכן, שטפו את קצות ה-STAGE עם 100 מיקרוליט
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים