אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:30 דק׳ • January 15th, 2026
התחל עם סרום אנושי מדולל סדרתי המכיל ריכוזים משתנים של נוגדנים מנטרלים נגד תסמונת נשימתית חריפה חמורה קורונה 2 או SARS-CoV-2.
הציגו נגיפים פסאודוטיפיים עם לוציפראז RNA, אינטגראז וטרנסקריפטאז הפוך, עטופים בתוך שכבת שומנים דו-שכבתית המכילה חלבוני ספייק של SARS-CoV-2.
נוגדנים מנטרלים את הנגיפים על סמך דילול בסרום, כאשר דילולים נמוכים יותר מציגים נטרול מקסימלי.
הציגו תאי מטרה המבטאים קולטני אנזים-2 הממירים אנגיוטנסין או קולטני ACE2 ופרוטאז טרנסממברני סרין-2 או TMPRSS2.
בדילולים גבוהים יותר בסרום, נגיפים לא מנוטרלים מקיימים אינטראקציה עם קולטני ACE2, בעוד TMPRSS2 מבקע את חלבון הספייק, ומאפשר איחוי וירוסים.
עם הכניסה, ה-RNA של לוציפראז עובר העתקה הפוכה ל-DNA המשתלב בגנום המארח ומייצר אנזים לוציפראז.
החלף את המדיום במאגר בדיקה המכיל מצע לוציפראז וחומר ליזינג.
התאים משחררים לוציפראז תוך תאי, המקיים אינטראקציה עם המצע ומייצר זוהר גבוה.
כמת את הזוהר על פני דילול הסרום כדי לקבוע את אחוז נטרול הנגיף - הדילול שמשיג חמישים אחוז נטרול מייצג את טיטר הנטרול.
כדי להתחיל, הוסף 50 מיקרוליטר של DMEM עם 10 אחוז FBS ו-1 אחוז פניצילין-סטרפטומיצין לשורות B עד H, עמודות 1 עד 12 של צלחת לבנה של 96 בארות.
הוסף 5 מיקרוליטר של נסיוב החלמה לבארות בשורה A, עמודות 2 עד 10, בנפח כולל של 100 מיקרוליטר DMEM עם 10 אחו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים