בדיקות להערכה איכותית וכמותית של ריכוזי גלוקוז בשתן עכברים

קח טיפה של שתן טרי של עכבר וטבול רצועה לזיהוי גלוקוז המכילה גלוקוז אוקסידאז, פרוקסידאז וכרומוגן.

גלוקוז אוקסידאז מחמצן את הגלוקוז בשתן, ויוצר גלוקונולקטון ומי חמצן.

יתר על כן, פרוקסידאז משתמש במי חמצן כדי לזרז את חמצון הכרומוגן, ויוצר תוצר צבעוני, בעוצמה פרופורציונלית לריכוז הגלוקוז בשתן.

השווה את הצבע עם טבלת הייחוס של הרצועה להערכה איכותית של הגלוקוז בשתן.

למדידת גלוקוז כמותית בשתן, קח צלחת מרובת בארות עם תקני ריכוז גלוקוז ודגימת שתן העכבר שנאספה לאורך תקופה מוגדרת.

הוסף תערובת בדיקה המכילה גלוקוז אוקסידאז, פרוקסידאז וריאגנטים לצימוד אינדיקטורים.

גלוקוז אוקסידאז מקל על חמצון הגלוקוז, ויוצר גלוקונולקטון ומי חמצן. פרוקסידאז מזרז את התגובה בין ריאגנטים צימוד למי חמצן, ויוצר מוצר בצבע ורוד.

בעזרת קורא מיקרופלייט מודדים את ספיגת המוצר הצבעוני.

עם עקומת תקן הגלוקוז שנוצרה, קבע את ריכוז הגלוקוז בשתן.

התחל בהנחת חתיכת פרפילם נקי על משטח ישר. הרם בעדינות את העכבר בזנב והניח אותו על הפרפילם.

רסנו את העכבר על ידי הקשקוש באמצעות האגודל והאצבע המורה, וגרמו לעכבר להשתין כתגובת לחץ. אפשר לטיפת שתן ליפול על פני השטח של הפרפילם ואז החזיר את העכבר לכלוב שלו.

טבלו את קצה המגיב של רצועת זיהוי גלוקוז בטיפת השתן הטרייה. הסר מיד את הרצועה והניח אותה שטוחה על משטח כשצד הצבע כלפי מעלה. לאחר מכן, המתן לפחות 30 שניות עד שצבע יתפתח במלואו על הרצועה. השווה את הצבע המפותח עם תרשים ההתייחסות שסופק על ידי היצרן.

הרכיבו את הכלוב המטבולי על פי הוראות היצרן, ומלאו את מכלול ההזנה באבקת צ'או, ולאחר מכן, חברו אותו ללשונית המתכת המתאימה בתא העליון.

אבטח את תומך בקבוק המים ללשונית המתכת שנותרה בתא העליון. מלאו את בקבוק המים הריק והחליקו אותו לתוך תומך הבקבוק, וודאו שצינור הלגימה נמצא בחור.

הניחו עכבר בודד בכלוב המטבולי וכסו אותו במכסה, וודאו שמכסה הכלוב מותאם כהלכה. מקם את צינור איסוף השתן וצינור איסוף הצואה במקומם ברצפת החדר התחתון.

לאחר 24 שעות, שלף את צינור איסוף השתן ובצע בדיקת גלוקוז כדי לקבוע את ריכוז הגלוקוז בשתן. אם בדיקת הגלוקוז לא תבוצע באותו יום, הקפיאו את דגימת השתן במקפיא מינוס 80 מעלות צלזיוס.

אם משתמשים בדגימת שתן קפואה, יש להפשיר אותה תחילה. הכן שמונה תקנים הנעים בין 25 ל -0 מיליגרם לדציליטר, בהתאם להוראות ערכת הבדיקה.

הכן בארות סטנדרטיות ובארות דגימות שתן בצלחת של 96 בארות, כולן בכפולות, על פי מדריך הערכה. התחל את התגובה על ידי הוספת הכמות המומלצת של תערובת האנזימים לכל הבארות. מכסים את הצלחת ונותנים לה לדגור במשך 10 דקות בחום של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, קרא את הספיגה ב-500 עד 520 ננומטר באמצעות קורא צלחות.

נתח את הנתונים על פי הוראות ערכת הבדיקה ושרטט את הספיגה של כל תקן לעומת ריכוז הגלוקוז. השתמש בגרף זה כדי לקבוע את ריכוז הגלוקוז של דגימת השתן של 24 שעות. אם ריכוז השתן נמצא מחוץ לטווח הסטנדרטי, יש לדלל את דגימת השתן.