אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:51 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם צלחת מרובת בארות המצופה בחיסון בדיקה וחסום אתרי אינטראקציה לא ספציפיים.
רכוש דגימת סרום מעכבר שהוזרק לו חיסון הבדיקה.
סרום זה מכיל נוגדנים אימונוגלובולין G, או IgG, המזהים את חיסון הבדיקה.
לבארות המצופות בחיסון, הוסף דגימות סרום מדוללות סדרתיות.
ה-IgG נקשרים לחיסון. יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.
הוסף נוגדנים משניים מצומדים לפרוקסידאז הנקשרים ל-IgGs. הסר נוגדנים משניים לא קשורים.
הוסף מצע כרומוגני. הפרוקסידאז מקיים אינטראקציה עם המצע ויוצר מוצר בצבע כחול.
הכניסו חומצה כדי לעצור את התגובה. השינוי ב- pH הופך את התמיסה לצהובה.
בעזרת ספקטרופוטומטר, מדוד את עוצמת הצבע של כל באר כדי לקבוע את ריכוז ה-IgG בדגימת הסרום.
לציפוי אנטיגן של מבחן האימונוסורבנט המקושר לאנזים, או צלחת ELISA, יש לדלל אנטיגן חלבון HI ל-10 מיקרוגרם למיליליטר עם תמיסת ציפוי, ולהוסיף 100 מיקרוליטר מהאנטיגן המדולל לבאר בצלחת ELISA. דגרו את הצלחת בחום של 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. לאחר הדגירה יש לשטוף את הצלחת עם 300 מיקרוליטר PBST לבאר.
אטמו את הבארות ב -300 מיקרוליטר מתמיסת האיטום לבאר למשך שעתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, יש לדלל שלושה מיקרוליטרים של נסיוב העכברים מכל קבוצת ניסוי 100 פעמים על ידי הוספת 297 מיקרוליטר של PBST, ולמערבל את הסרום המדולל. הוסף 100 מיקרוליטר של סרום מדולל לבאר בצ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים