בדיקה למדידת הצטברות של בדיקה אנטיביוטית פלואורסצנטית בתאי חיידקים

קח מבחנות המכילות דגימות חיידקים.

בדגימת הבדיקה, הוסף מולקולות מעכבות כדי לחסום את משאבת הפליטה האנטיביוטית של החיידקים.

צנטריפוגה והשליכו את הסופרנטנט.

הוסף בדיקות אנטיביוטיות מצומדות פלואורופור שנכנסות לתאי החיידקים.

בדגימת הבקרה, משאבת הפליטה מוציאה את הבדיקות לתווך החוץ-תאי.

בדגימה המטופלת במעכב, משאבת הפליטה החסומה אינה יכולה להוציא את הבדיקות, וגורמת להצטברותם.

צנטריפוגה את הדגימות. השליכו את הסופרנטנט המכיל בדיקות חוץ-תאיות.

הוסף מאגר ליזה ואחריו ליזוזים כדי להחליש את דופן התא החיידקי.

בצע מחזורי הקפאה-הפשרה, סוניקציה וחשיפה לטמפרטורה גבוהה כדי ליז את התאים.

צנטריפוגה. העבירו את הסופרנטנט לקרום פילטר.

שוטפים ואוספים את המסנן המכיל את הבדיקות.

מדוד את עוצמת הקרינה של המסנן.

עוצמת פלואורסצנטיות גבוהה יותר בדגימות חיידקים שטופלו במעכבים מצביעה על אובדן תפקוד הפליטה, מה שמוביל להצטברות בדיקה תוך תאית.

לניתוח הצטברות בדיקה, פס את מלאי הגליצרול של זני החיידקים על צלחות אגר LB לדגירה של לילה ב-37 מעלות צלזיוס. למחרת בבוקר, בחרו מושבה אחת מהצלחת לתרבית לילה במרק ליזוגני בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. למחרת בבוקר, יש לדלל את תרבית הלילה בערך פי 50 במדיום טרי.

כאשר התרבית מגיעה לשלב אמצע העץ, גלולה את החיידקים על ידי צנטריפוגה ושפכה את המדיום. השעו מחדש את החיידקים ב-1 מיליליטר של PBS,