בידוד תאי T רוצחים טבעיים אינווריאנטיים ממודל עכבר
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:35 דק׳ • July 8th, 2025
התחל בהזרקה תוך-צפקית של גליקוליפיד סינתטי לעכבר.
תאים מציגי אנטיגן, או APCs, מפנימים את הגליקוליפיד ומציגים אותו באמצעות מולקולת MHC הלא קלאסית CD1d.
ה-APCs נודדים לטחול ומקיימים אינטראקציה עם תאי ה-T הרוצחים הטבעיים הקבועים או תאי iNKT, וגורמים להפעלה והתפשטות של תאי iNKT.
קציר את הטחול. נתק אותו מכנית כדי ליצור מתלה של תא יחיד.
העבירו את התאים לצינור. הוסף מדיום שיפוע צפיפות וצנטריפוגה כדי להפריד בין הלימפוציטים.
אוספים את הלימפוציטים. הוסף טטרמרים CD1d עם תווית פלואורופור עמוסים באנטיגן גליקוליפיד המקיימים אינטראקציה עם תאי iNKT.
הסר טטרמרים לא קשורים. כיסוי עם מיקרו-חרוזים מגנטיים הנקשרים לפלואורופורים המקושרים לטטרמר.
הסר חרוזים לא קשורים והעמיס את מתלה התאים על עמוד מגנטי.
תחת השדה המגנטי, תאי ה-iNKT הקשורים לחרוזים נשמרים בעמודה בעוד התאים הנותרים זורמים דרכם.
הסר את העמוד מהשדה המגנטי. הוסף מאגר פליטה כדי להוציא את תאי ה-iNKT.
הזרקת עכבר DBA/1 תקין תוך צפקי עם אלפא-GalCer, במינון של 0.1 מיליגרם לק"ג משקל גוף. שלושה ימים לאחר הדוגמנות, לאחר הרדמה, יש לבודד את הטחול של העכבר. הכן מתלה חד תאי על ידי חיתוך וטחינה של הטחול במסננת של 200 רשת. שטפו את מתלה התא עם PBS. צנטריפוגה בחום של 200 פעמים גרם למשך 5 דקות, והשליכו את הסופרנטנט.
השעו מחדש את התאים עם 1 מיליליטר של תמיסת דילו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים