טכניקת Ex Vivo לייצור תאי T קולטני אנטיגן כימריים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:38 דק׳ • July 8th, 2025
קחו תאי T ראשוניים, מעורבבים עם חרוזים מגנטיים מצומדים לנוגדנים במדיום בתוספת אינטרלוקין-2, ודגרו.
הנוגדנים נקשרים ל-CD3 בקומפלקס הקולטן של תאי T ולקולטן הגירוי המשותף CD28, בעוד שאינטרלוקין-2 נקשר לקולטן הקוגנטי שלו, וגורם להפעלה והתפשטות של תאי T.
הציגו וקטורים לנטי-ויראלים עם RNA טרנסגני המקודד קולטן אנטיגן כימרי או CAR, ודגרו.
עם היתוך קרום תא וקטור, ה-RNA הנגיפי עובר שעתוק הפוך ל-DNA, ומשתלב בגנום המארח.
תאי ה-T המומרים מבטאים CARs הקשורים לפני השטח.
קצור את התאים במרווחי זמן מוגדרים.
לשימור בהקפאה, קחו כמות גדולה של תאים, נתקו את החרוזים הקשורים על ידי פיפטינג והפרידו ביניהם מגנטית.
סובב את התאים והשהה אותם מחדש במדיום שימור בהקפאה.
הקפיאו את התאים ואחסנו אותם בטמפרטורה קריוגנית.
כדי להעריך את ביטוי ה-CAR, קח כמות גדולה נוספת של תאים, סובב את התאים והשהה אותם מחדש במאגר.
להציג נוגדן מתויג פלואורסצנטי ספציפי ל-CAR ולזהות ביטוי CAR באמצעות ציטומטריית זרימה.
הפעל תאי T אנושיים ראשוניים טריים או משומרים בהקפאה על ידי ערבובם עם חרוזים מגנטיים נגד CD3/CD28 ביחס של 3 חרוזים לתא T בבארות של כלי התרבית. תרבית תאי T במדיום X-VIVO 15 בתוספת סרום AB אנושי רגיל, L-גלוטמין, HEPES ו-IL-2.
הפעל את תאי ה-T בריכוז של מיליון תאי T למיליליטר במהלך ההתפשטות, ותרבית אותם ב-37 מעלות צלזיוס עם 20% ח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים