שיפור התמרה נגיפית בתאי הרג טבעיים באמצעות פולימר קטיוני
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:21 דק׳ • July 8th, 2025
קח תאי הרג טבעיים, או NK. הוסף וקטורים של lentivirus המורכבים מאנזימים נגיפיים ומולקולות RNA מהונדסות המקודדות חלבון פלואורסצנטי.
הוסף פולימרים קטיוניים ומשקע את התאים והנגיפים.
הפולימרים מנטרלים את המטענים השליליים הן על הנגיף והן על התא, ומקלים על איחוי הממברנה.
ה-RNA עובר העתקה הפוכה ל-DNA ומשולב בגנום המארח, מה שמאפשר ביטוי חלבון פלואורסצנטי.
הוסף מדיה בתוספת ציטוקין אינטרלוקין-2, או IL-2.
IL-2 מפעיל איתות תוך-תאי המקדם הישרדות ושגשוג של תאי NK תוך שמירה על ביטוי טרנסגנים.
העבירו את התערובת לבאר מצופה בנוגדנים הנקשרים לקולטנים חיסוניים ספציפיים בתאי NK, ומעוררים אותם לשחרר ציטוקינים אנטי-ויראליים.
כמת את הציטוקינים המשתחררים כדי להעריך את השפעת הפולימר על ייצור הציטוקינים.
הוסף צבעים פלואורסצנטיים כדי לתייג את ה-DNA של תאים נמקיים.
באמצעות ציטומטריית זרימה, זהה תאים חיים וכימת את האות של החלבון הפלואורסצנטי כדי למדוד את היעילות של התמרה המושרה על ידי פולימרים.
השעו תאי NK ראשוניים של עכבר או אדם בבארות של צלחת של 24 בארות ב-0.5 x 105 למיליליטר של מדיום עם סופרנטנט של GFP lentivirus ב-MOY של 5, 10 ו-20 ובנוכחות פוליברן, פרוטמין סולפט או דקסטרן.
צנטריפוגה את הצלחות ב -1,000 פעמים גרם למשך 60 דקות. לאחר מכן, מבלי לרוקן את הסופרנטנט, תרבית התאים באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס עם 5.2
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים