JoVE Encyclopedia of Experiments
אימונולוגיה
0 צפיות • 2:12 דק' • July 8th, 2025
התחל עם נקבת עכבר מורדמת במצב שכיבה, נושאת גידולים אורותליים באפיתל שלפוחית השתן שלה.
אבטח את הרגליים האחוריות, אתר את פתח השופכה והכנס קטטר לשלפוחית השתן של העכבר. שטפו את שלפוחית השתן כדי להוציא שתן.
הזרקו חלבון מפעיל נויטרופילים הליקובקטר פילורי, או HP-NAP - חלבון חיידקי אימונומודולטורי.
במיקרו-סביבת הגידול, HP-NAP מקיים אינטראקציה עם קולטנים דמויי טול על נויטרופילים ויוזם מפל איתות, מה שמגביר את ביטוי הציטוקינים הפרו-דלקתיים.
הציטוקינים מעוררים התמיינות של לימפוציטים מסוג T נאיבי ללימפוציטים מסוג T מסייע מסוג 1, או Th1, וסוג 1 ציטוטוקסי, או Tc1, המייצרים אינטרפרון-גמא.
אינטרפרון-גמא מעכב היווצרות כלי דם חדשים, ומגביל את זמינות החומרים המזינים והחמצן לגידול.
בנוסף, הוא מווסת את מולקולות ה-MHC המציגות אנטיגן גידול על תאי הגידול, ומקל על אינטראקציה עם תאי Tc1.
אינטראקציה זו מביאה לשחרור מולקולות ציטוטוקסיות הגורמות למוות של תאי גידול, ומדגימות את היעילות האנטי-גידולית של HP-NAP.
לפחות שלושה ימים לאחר הזרקת תאי ה-MB-49, לאחר הרדמת החיה, בצעו צנתור כפי שהודגם זה עתה והשתמשו במזרק של 1 מיליליטר עם 200 עד 300 מיקרוליטר PBS סטרילי, שטפו את שאריות השתן משלפוחית השתן, ושאבו את כל הנוזל.
הזריק 50 מיקרוגרם של חלבון מפעיל נויטרופילים הליקובקטר פילורי או HPNAP, לכל 150 מיקרוליטר PBS לשלפוחית השתן, והשאיר את המזרק מחובר לקטטר כדי למנוע דליפה. לאחר שעה, הוציאו בעדינות את הקטטר מהשופכה והניחו את העכבר בכלוב מתחת למנורת חימום עד שהוא מתעורר.