טיפול מבוסס תאים לדלקת מפרקים אוטואימונית במודל מורין

קחו תאי T רגולטוריים שמקורם ב-iPSC, או Tregs, המבטאים קולטנים ספציפיים לאובאלבומין. הזריק אותם לווריד הזנב של עכבר מאופק.

התאים מגיעים לממברנה הסינוביאלית המצפה את המשטח הפנימי של קפסולת מפרק הברך.

לאחר מכן, יש לתת אלבומין בסרום בקר שעבר מתילציה או mBSA, מתחלב עם אדג'ובנט.

אדג'ובנטים משפרים את ההצגה של mBSA לתאים המציגים אנטיגן, או APCs, המעבדים ומציגים את השברים באמצעות מולקולות MHC.

ה-APCs נודדים לבלוטות הלימפה, וגורמים להפעלת תאי T. תאי T מופעלים נודדים למפרק הברך.

יש להזריק mBSA בלבד ו-mBSA עם אובאלבומין במפרקי הברך השמאלית והימנית, בהתאמה.

בברך שמאל, APCs מציגים את שברי ה-mBSA לתאי T מופעלים, מה שגורם לשחרור ציטוקינים פרו-דלקתיים ומוביל לנזק לרקמות ונפיחות במפרקים, המכונה דלקת פרקים.

בברך ימין, Tregs מקיימים אינטראקציה עם APCs המציגים ביצאלבומין ומשחררים ציטוקינים אנטי דלקתיים, מפחיתים נזק לרקמות ונפיחות במפרקים, ובכך משפרים את דלקת המפרקים.

התחל בניתוק תרביות התאים המעניינות עם טריפסין, והשעיה מחדש של כל סוג תא ב-10 מיליליטר של מדיום טרי. צלחו כל תרבית תאים בצלחת חדשה של 10 סנטימטרים, ואפשרו לתאי ההזנה להיצמד לחממת תרבית התאים. לאחר 30 דקות, אספו את ה-iPSCs הצפים, והעבירו את התרביות דרך מסנני תאים בודדים של 70 מיקרון כדי להסיר את אשכולות התאים לספירה.

השעו מחדש כל תרבית בריכוז של 1.5 x 10⁷ תאים למיליליטר ב-PBS קר, וסננו שוב לפי הצורך. לאחר מכן, הניחו עכברי C57BL6 נקבות בנות 4 עד 6 שבועות בזה אחר זה במסננת של בעלי חיים קטנים, והעבירו באימוץ 200 מיקרוליטר מסוג אחד של תא לכל עכבר לווריד הזנב של כל חיה.

השתמש בקליפר מד חוגה כדי למדוד את הנפיחות של שתי הברכיים כדי לקבוע את המדידה הבסיסית. 10 ימים לאחר העברת התאים, השתמש במזרק של 1 מיליליטר כדי להזריק לעכברים 100 מיקרוגרם של BSA שעבר מתילציה מתחלב באדג'ובנט פרוינד שלם בבסיס הזנב של כל חיית ניסוי.

17 ימים לאחר העברת התאים, לגרום לדלקת פרקים על ידי הזרקה תוך מפרקית של 20 מיקרוגרם של BSA שעבר מתילציה ב-10 מיקרוליטר PBS למפרק הברך השמאלית ו-20 מיקרוגרם של BSA שעבר מתילציה ו-100 מיקרוגרם של אובאלבומין שלם ב-10 מיקרוליטר PBS למפרק הברך הימנית של כל בעל חיים מורדם שהועבר לאימוץ.

שבעה ימים לאחר גרימת דלקת פרקים, מדוד שוב את הברכיים לחישוב אחוז העלייה בקוטר הברך וכרת את הפיקה בניתוח. תקן את המפרקים בפורמלין. לאחר מכן, לאחר הסרת האבדן ב-EDTA, הטמיעו את הברכיים בפרפין, וקבלו חתכים של 4 מיקרון לצביעה וניתוח היסטוכימיים.