אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 4:42 דק׳ • July 8th, 2025
קח וקטורים רטרו-ויראליים מעורבבים עם תאי טחול ראשוניים.
הווקטורים מכילים RNA טרנסגני המקודד קולטן אנטיגן כימרי או CAR, המכוון לאנטיגן ספציפי לגידול.
הציטוקין אינטרלוקין-2 במדיה מקדם באופן סלקטיבי את התפשטות תאי ה-T בעוד התאים האחרים מתים בסופו של דבר.
העבירו את התערובת למיקרופלטה המצופה בשברי פיברונקטין רקומביננטיים.
צנטריפוגה כדי להקל על שברי הפיברונקטין הקושרים את הווקטורים ותאי T, מתווכים אינטראקציה בין תא המארח של הנגיף והדגירה.
עם היתוך מעטפת הווקטורים עם קרום התא, האנזימים הוויראליים מתעתקים לאחור את ה-RNA המשוחרר ל-DNA ומשלבים אותו בגנום המארח.
תאי ה-T המומרים מבטאים CARs הקשורים לפני השטח, המורכבים ממקטע משתנה נוגדן חוץ-תאי המכוון לאנטיגן הספציפי לגידול ולאזורי איתות תוך-תאיים כדי להגיב לאנטיגן.
השעו מחדש את התאים לפני העברתם לצינור.
צנטריפוגה כדי להשליך את הסופרנטנט המכיל נגיפים לא מופנמים, ולהשעות מחדש את התאים במאגר לבדיקות במורד הזרם.
ביום שלאחר כריתת הטחול, הכינו PBS המכיל 25 מיקרוגרם למיליליטר שבר פיברונקטין אנושי רקומביננטי או RHFF וצפו צלחות 24 בארות שאינן מטופלות בתרבית רקמות על ידי הוספת 0.5 מיליליטר מהתמיסה לכל באר. למחרת, הסר את התמיסה מהבארות, והוסף 1 מיליליטר לבאר של 2% BSA ב-PBS.
דגירה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות, לאחר מכן, הסר את ה-BSA על ידי הפיכת הצלחת בחו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים