יצירת חיסון רב-ערכי נגד שלפוחית הממברנה החיצונית

קח פוליפלקסים טרנספקטיביים המכילים פלסמידים מטרה הקשורים לפולימר. הפלסמידים מקודדים אנטיגן ויראלי המאוחה לתג פפטיד ותג זיקה.

דגרו את הפוליפלקסים עם תאי יונקים, המפנימים את הפוליפלקסים בתוך אנדוזומים.

הפולימר גורם לקרע בשלפוחית. הפלסמידים המשוחררים מבטאים את האנטיגן הנגיפי, המופרש מחוץ לתא.

קצרו את הסופרנטנט המכיל את האנטיגן והמזהמים. הוסף חומר מתחרה בריכוז נמוך.

טען אותו על עמודת כרומטוגרפיה של זיקה.

תגי הזיקה נקשרים לשרף העמודה, ומשתקים את האנטיגן, בעוד שהסוכן המתחרה מקטין את הקישור הלא ספציפי.

הזרם את החומר המתחרה בריכוז נמוך, והסר מזהמים בעלי קשר חלש.

שטפו עם ריכוזי חומרים מתחרים הולכים וגדלים כדי לעקור את האנטיגנים הקשורים חזק, ולסלק אותם.

הכניסו שלפוחיות ממברנה חיצונית חיידקית, או OMVs, עם חלבון לוכד הקשור לפני השטח ודגירה.

תגי פפטיד אנטיגן נקשרים לחלבונים הלוכדים, ויוצרים חיסון OMV עם תצוגת אנטיגן רב-ערכית.

בצע טיהור OMV SpyCatcher. התחל בצנטריפוגה של תמיסת החיידקים. מסננים את הסופרנטנט עם מסנן ממברנה של 0.22 מיקרומטר, ואז מרכזים אותו באמצעות עמוד סיבים חלול. מסננים את התרכיז דרך מסנן ממברנה של 0.22 מיקרומטר, ואז צנטריפוגה אותו ב-150,000 פעמים גרם ב-4 מעלות צלזיוס למשך שעתיים באמצעות אולטרה-צנטריפוגה, והשליכו את הסופרנטנט בעזרת פיפטה. השעו את המשקעים עם PBS ואחסנו אותם במינוס