מודל תלת מימדי של תרבית משותפת של חדירת תאי T לספרואידים סרטניים

התחל עם צלחת תרבית המכילה יציקת אגרוז. צוות השחקנים מורכב מתא זריעה עם מספר מיקרו-בארות.

כל מיקרובאר מכילה ספרואיד גידול במדיום תרבית. הספרואידים הם אגרגטים תלת מימדיים של תאי גידול.

ראשית, הסר את המדיום המקיף את יציקת האגרוז. לאחר מכן, הסר את המדיום בתוך הגבס מפינה אחת של תא הזריעה כדי למנוע אובדן של ספרואידים.

הכנס תרחיף של תאי T ספציפיים לגידול טיפה לתוך תא הזריעה, מה שמאפשר לתאים להתיישב במיקרו-בארות המכילות את הספרואידים.

לאחר מכן, הוסף מדיום תרבית סביב יציקת האגרוז ודגר את הצלחת בתנאים פיזיולוגיים כדי לפתח תרבית משותפת.

במהלך הדגירה, תאי ה-T מקיפים את הספרואיד. תת-קבוצה של תאי T חודרת לספרואיד, בעוד שאחרים נשארים בפריפריה, ויוצרים מודל תלת-ממדי של קו-תרבות.

כדי להקים תרבית משותפת של תאי T, השהה מחדש את המספר המתאים של תאי T ב-190 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאי T מתאים לכל באר, והטה את צלחת 12 הבארות כדי לאפשר הסרה של מדיום תרבית התאים המקיף את יציקת האגרוז תחילה, ולאחר מכן בתא הזריעה, מבלי להסיר את הספרואידים.

השתמש במיקרוסקופ אור כדי לבדוק אם נשאבו ספרואידים, והחזק את הפיפטה הטעונה P200 כחצי סנטימטר מעל כל יציקה, זרע בזהירות את תאי ה-T על היציקה בצורה טיפתית, מבלי לעקור את הספרואידים. לאחר שכל הגבסים נזרעו, החזירו בזהירות את הצלחת לחממת תרבית התאים למשך 15 דקות, לפני הוספת מדי