הערכת ההשפעות של השתלת מיקרוביוטה בצואה בעכבר עם מחסור באינטרלוקין-10

התחילו עם עכבר מאופק חסר אינטרלוקין-10, ציטוקין אנטי דלקתי, מה שגורם לדלקת במעי הגס.

קח מזרק מלא בתרחיף צואה עשיר בחיידקי מעיים מגוונים, מעכבר בריא.

לאחר מכן, חבר צינור דרך הפה למזרק.

הכניסו את הצינור הזה לפה, והנחו אותו כלפי מטה לבטן העכבר.

כעת, יש לתת את תרחיף הצואה ישירות לקיבה, ואפשר לו להגיע בהדרגה למעי הגס.

ברגע שהם נכנסים למעי הגס, חיידקי הצואה מתרבים ומתיישבים, ומבססים מחדש את חיידקי המעיים.

לאחר מכן החיידקים המושבים משחררים מטבוליטים משניים שונים.

מטבוליטים אלה מסייעים בייצור מוצין, אשר מתקן את אפיתל המעי הגס ומשקם את שלמות המעי.

בתוך אפיתל המעי הגס, חיידקי הצואה והמטבוליטים שלהם מקיימים אינטראקציה עם תאי חיסון.

אינטראקציה זו גורמת לתאי החיסון לשחרר ציטוקינים אנטי דלקתיים, מה שמוביל להפחתה בדלקת המעי הגס בעכבר חסר אינטרלוקין-10.

הכן תמיסה סטרילית על ידי הוספת תמיסת גליצרול 10% למי מלח רגילים. הוסף 10 מיליליטר מתמיסה זו לצינור החרוטי עבור כל גרם כדורי צואה. הפוך את התערובת הזו להומוגניזציה במהירות נמוכה שלוש פעמים למשך 30 שניות, באמצעות הומוגנייזר ספסל בתוך מכסה אדים כדי להשעות מחדש את הצואה. מסננים את המתלה הצואתי דרך שתי שכבות של גזה כותנה סטרילית. אחסן את המסנן באופן זמני במקרר עד שש שעות, או ארוז אותו בבקבוקונים קריוגניים סטריליים, ואחסן אותו במקפיא מינוס 80 מעלות.

יש לנקות היטב את ההומוגנייזר או הבלנדר בהתאם להליך סטנדרטי. הפשירו את תרחיף הצואה הקפוא על קרח אם משתמשים בדגימות קפואות. מערבבים את מתלה הצואה המופשר על ידי מערבולת. העבירו את מתלה הצואה הטרי או המופשר למזרקים של 1 מיליליטר. שקלו את העכברים ובחרו את גודל המחט הנכון ואת נפח המינון המרבי.

בדוק את מחט הגאווג' על ידי מדידת האורך מקצה האף של העכבר לתחתית עצם החזה. מלאו את המזרק ב-10% גליצרול בתרחיף מי מלח או צואה, והוציאו בועות אוויר בתוך המזרק והמחט. הנח כלוב עכבר אחד בארון הבטיחות הביולוגית, הסר את מכסה כלוב הפלסטיק והשאיר את מתלה המתכת במקומו.

פתח את מתלה המתכת ביד אחת. תפוס עכבר אחד בזנב והניח אותו על מתלה המתכת. החזיקו את העכבר בזנב ביד אחת, והשתמשו באגודל ובאצבעות האמצעיות של יד אחרת כדי לרסן את החיה על ידי אחיזת העור מעל הכתפיים. הרחיבו בעדינות את ראש החיה לאחור והחזיקו את הראש במקומו ביד אחת. הנח את מחט הגאווג' על גבי הלשון בתוך הפה.

התקדמו בעדינות לאורך החך העליון עד שהמחט מגיעה לוושט. העבירו את המחט בצורה חלקה בתנועה אחת. לאחר שהמחט ממוקמת כראוי ומאומתת, נהל לאט את החומר על ידי דחיפה של המזרק המחובר למחט. לאחר המינון, משוך בעדינות את המחט החוצה. סמן את העכבר, והחזיר אותו לכלוב הביתי שלו. עקוב אחר החיה במשך 5 עד 10 דקות על ידי חיפוש סימנים של נשימה מאומצת או מצוקה. עקוב אחר העכברים שוב בין 12 ל-24 שעות לאחר השתלת המיקרוביוטה הצואה.