בדיקת מבחנה להערכת הפעילות האנטי-סרטנית של תאי CAR T ספציפיים לגידול

קח צלחת מרובת בארות המכילה תאי גידול לימפומה של תאי B המבטאים אנטיגן משטח ספציפי לתאי B ואנזים לוציפראז ציטופלזמי

.

הכנס תאי CAR T לבארות נבחרות ודגר. התאים מבטאים קולטני אנטיגן כימריים, או CARs, המהווים תחום חוץ-תאי המכוון לאנטיגן הגידול ולתחומי האיתות התוך-תאיים.

CAR נקשר לאנטיגן הגידול, וגורם להפעלה של תאי ה-CAR T.

התאים המופעלים משחררים ציטוקינים המקדמים את הפעילות האנטי-גידולית של התאים, וגורמים לשחרור רעלים.

הרעלים נכנסים לתאי הגידול וגורמים למוות של תאים.

סובב את התאים ובודד את הסופרנטנט. כמת את הציטוקינים כדי להעריך את פעילות תאי ה-CAR T.

השעו מחדש את התאים במאגר המכיל לוציפרין, מצע ביו-לומינסצנטי.

עם הכניסה, לוציפרין מתחמצן על ידי לוציפראז בתאי גידול חיים, ופולט אור.

מדוד את הביולומינסנציה כדי לזהות אות מופחת בתאי הגידול המטופלים, המאשר ציטוטוקסיות בתיווך תאי CAR T.

ראשית, זרעו 10,000 תאי גידול סינגניים חיוביים ל-CD19 עם או בלי ביטוי לוציפראז, ו-100 מיקרוליטר של TCM לכל באר של צלחת תרבית רקמה תחתונה U של 96 בארות. הוסף 10,000 תאי CD19 CAR T ו-100 מיקרוליטר TCM לכל באר.

הגדר את הפקדים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. תרבית משותפת של התאים ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני למשך 16 עד 24 שעות. לאחר מכן, צנטריפוגה את הצלחת ב -500 פעמים גרם למשך חמש דקות. אסוף את הסופרנטנט להמשך ניתו