פיתוח מודל עכבר אנושי עם תאי כבד אנושיים ותאי חיסון

התחילו עם עכבר מורדם וחסר חיסון שחסר תאים חיסוניים שונים.

עכבר טרנסגני זה מטופל מראש בחומר אנטי-ויראלי וכימותרפי. החומר האנטי-ויראלי מקיים אינטראקציה בלעדית עם חלבונים נגיפיים הקיימים בתאי כבד טרנסגניים, ומקדם את חיסולם.

בינתיים, החומר הכימותרפי מבטל את תאי הגזע המתחלקים באופן פעיל במח העצם, ויוצר נישה ליצירת תאים חיסוניים.

נתח את העכבר וחשוף את הטחול.

קח את תרחיף התאים של תאי כבד אנושיים ותאי אב גזע המטופויאטיים או HSPCs והזריק אותם לקוטב התחתון של הטחול.

קשרו את הטחול מעל אתר ההזרקה כדי להגביל את התאים לקוטב התחתון ולהקל על כניסתם למחזור העכבר.

סגור את החתך.

תאי הכבד המוזרקים מגיעים לרקמת הכבד ומקימים תאי כבד אנושיים במודל העכבר.

במח העצם, HSPCs נודדים מתמיינים לתאי חיסון אנושיים שונים.

זה מפתח מודל עכבר מואנש כפול עם תאי כבד אנושיים ותאי חיסון.

ראשית, חבר קצה אחד של צינור הארכה סטרילי למחט בגודל 30, ואת הקצה השני למזרק של 1 מיליליטר. מלאו את המזרק בתרחיף של HEPs ו-HSPCs מאוגדים. הכנס את המזרק לחריץ של פיפטה חוזרת, והתאם את המתקן להוצאה של 10 מיקרוליטר בכל לחיצה. גלח כל עכבר כמתואר בפרוטוקול הטקסט, ושפשף את הצד השמאלי של גופו של כל עכבר ב-10% פובידון-יוד, ואחריו 70% אלכוהול איזופרופיל.

בעזרת מספריים מסוג Vannas, בצע חתך קטן בעור, בשריר ובצפק, משמאל לדופן הצפק כדי להיכנס לחלל הצפק כ -5 מילימטרים מתחת לקצה התחתון של כלוב הצלעות. אתר את הטחול והשתמש במלקחיים כדי למשוך אותו מעט לאזור ההפעלה לגישה נוחה, והכנס את המחט בגודל 30 לקוטב התחתון של הטחול.

לאחר מכן, פתח את הבוכנה של פיפטת החלוקה, והוציאו 10 מיקרוליטר מהנפח בכל פעם, עם מגבלה של 60 עד 80 מיקרוליטר לטחול. משוך את המחט לאט, והצמד את הטחול בעזרת קליפס קשירה באמצעות מכשיר קשירה. לאחר מכן, השתמשו באפליקטורים עם קצה כותנה, רטובים ב-PBS סטרילי, כדי לדחוף את הטחול בחזרה לחלל הגוף. השתמש בדפוס תפר קטוע כדי לסגור את שכבת השרירים של דופן הבטן. יש להשלים את סגירת העור עם דפוס תפרים קטוע באמצעות תפרים שאינם נספגים.