טכניקה ליצירת תאי CAR T ספציפיים לאנטיגן
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 3:32 דק׳ • July 8th, 2025
קח צלחת מיקרובאר מצופה בשברי פיברונקטין רקומביננטיים והוסף תאי T חיוביים ל-CD8 עכבריים פעילים.
הציגו וקטורים רטרו-ויראלים המכילים RNA טרנסגני המקודד קולטן אנטיגן כימרי או CAR.
מכסים את הצלחת ואוטמים אותה בשקית כדי למנוע זיהום. צנטריפוגה של הצלחת במהירות נמוכה כדי להקל על אינטראקציה בין תא הנגיף.
פיברונקטין נקשר לנגיף ולתא, והופך אותם למיקומים כדי לשפר את העברת הגנים בתיווך הנגיף.
לאחר צנטריפוגה, הסר את השקית האטומה ודגר את הצלחת בתנאים פיזיולוגיים.
המעטפת של הווקטור הנגיפי מתמזגת עם קרום התא, ומשחררת את ה-RNA הנגיפי והאנזימים.
האנזימים הוויראליים מתעתקים לאחור את ה-RNA המשוחרר ומשלבים את ה-DNA המתקבל בגנום המארח, ומאפשרים לתאים לבטא CARs הקשורים לפני השטח.
ה-CAR כולל תחום קשירת אנטיגן ספציפי לאנטיגן המטרה ותחומי האיתות להפעלת תאי T.
תאי ה-CAR T הספציפיים לאנטיגן מוכנים לבדיקות במורד הזרם.
ביום הראשון, הכינו צלחות מצופות שברי פיברונקטין אנושי על ידי הוספת 0.5 מיליליטר פיברונקטין לבארות של צלחת בת 24 בארות ודגירה למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס.
למחרת, הסר את תמיסת הפיברונקטין והוסף 1 מיליליטר של 2% BSA ב-PBS לבאר. דגרו את הצלחת בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות, ושטפו את הבארות המטופלות עם 1 מיליליטר PBS סטרילי. הצלחת מוכנה לשימוש לאחר הסרת תמיסת הכביסה.
ספרו את תאי ה-CD8 T המופעלים באמצעות ט
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים